换一批液相色谱-高分辨质谱法评价人干扰素α2b层析工艺对杂质蛋白的去除效果
Evaluation of removal efficiency of human interferon α2b chromatography process for impurity proteins using liquid chromatography-high resolution mass spectrometry
摘要目的 采用液相色谱-高分辨质谱(liquid chromatography-high resolution mass spectrometry,LC-HRMS)法评价人干扰素α2b(human interferon α2b,hIFNα2b)纯化过程中层析工艺对杂质蛋白[IFN相关蛋白及宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)]的去除效果,以期为hIFNα2b生产工艺的改进提供实验依据.方法 采用LC-HRMS法对hIFNα2b层析工艺过程中的IFN相关蛋白(包括脱酰胺IFN、氧化IFN、乙酰化IFN)及HCP进行完整蛋白水平分析,对hIFNα2b翻译后修饰位点及HCP多肽水平进行检测.结果 疏水层析(hydrophobic interaction chromatography,HIC,M柱)可去除HCP;阴离子交换层析(anion exchange chromatography,AEC)可去除HCP、脱酰胺IFN和乙酰化IFN;HIC(B柱)可去除氧化IFN.hIFNα2b的主要乙酰化位点(K34、K121、K131和K134)、主要氧化位点(M16、M21、M59和M148)及主要脱酰胺位点(N45、N156、Q5、Q21、Q46、Q124)中的Q5和Q21均位于蛋白表面,易受环境条件的影响,发生乙酰化、氧化等反应.结论 在hIFNα2b纯化工艺中,层析纯化可有效去除IFN相关蛋白和HCP,表明LC-HRMS法可用于IFN纯化工艺的研究.
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关键词
人干扰素α2b相关蛋白宿主细胞蛋白质层析工艺液相色谱-高分辨质谱Human interferon α2b(hIFNα2b)Related proteinsHost cell proteinsChromatography processLiquid chroma-tography-high resolution mass spectrometry(LC-HRMS)
分类号
R917（药物分析）
栏目名称
发布时间
2025-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家质量基础的共性技术研究与应用专项（2021YFF0600804）
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