换一批人血清中诺如病毒GⅠ.1和GⅡ.4型IgG抗体定量ELISA检测方法的建立及验证
Establishment and verification of a quantitative detection ELISA method for IgG antibodies against Norovirus G Ⅰ.1 and G Ⅱ.4 in human serum
摘要目的 建立诺如病毒(Norovirus,NoV)G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,并进行验证,为NoV疫苗的免疫原性评价和血清流行病学研究提供更准确的抗体检测手段.方法 将高滴度NoV G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型IgG抗体阳性人血清混合后分装冻干,制成实验室参考品,采用四参数拟合计算半数有效浓度(EC50)进行多次独立标定.以标定后的实验室参考品为工作标准品,建立基于四参数法的NoV G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,并进行线性、测定范围、精密度、准确度验证.以G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型IgG抗体阴阳性人血清为供试品,采用接受者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法,基于检测结果的特异性和灵敏度,确定检测方法中用于阳性结果判定的cut-off值.结果 实验室参考品G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型IgG抗体效价标定结果分别为434.2和456.5.基于实验室参考品,建立了四参数法NoVG Ⅰ.1和G Ⅱ.4型人血清IgG抗体定量ELISA检测方法,9次重复试验标准曲线R2值均大于0.99;G Ⅰ.1型IgG抗体效价测定范围为2.714～0.042,G Ⅱ.4型为5.706～0.045;重复性试验相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)≤ 10％,中间精密度RSD≤25％;加标试验回收率范围为75％～125％.确定G Ⅰ.1型cut-off值为6.705(特异性为96.6％,敏感性为96.3％),G Ⅱ.4型为12.70(特异性和敏感性均为100％).结论 通过制备和标定实验室NoVG Ⅰ.1和G Ⅱ.4型IgG阳性人血清,建立了一种基于四参数拟合标准曲线的NoV人IgG抗体定量ELISA检测方法,并初步确定了G Ⅰ.1和G Ⅱ.4型血清IgG结果判定的cut-off值,该方法测定范围较大,线性、精密度、准确度、特异性和灵敏度均良好.
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