换一批小鼠肝炎病毒M蛋白在杆状病毒系统中的表达及其抗原性评价
Expression of mouse hepatitis virus M protein in baculovirus expression system and evaluation of its antigenicity
摘要目的 通过杆状病毒系统表达小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)M蛋白,并评价其抗原性,以期为MHV诊断试剂盒的研制奠定基础.方法 通过序列比对筛选出高度保守的MHVM蛋白基因序列(GenBank:FJ647223),经密码子优化后克隆至载体pFastBac Ⅰ,转化至感受态E.coli DH10 Bac?,经蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-M.将重组杆粒转染Sf9昆虫细胞,拯救获得重组杆状病毒rBV-M,透射电镜下观察病毒粒子形态,采用间接免疫荧光和Western blot法鉴定重组M蛋白在Sf9细胞中的表达情况.以抗呼肠孤病毒3型(reovirus type-3,Reo-3)、小鼠微小病毒(minute virus of mice,MVM)、小鼠仙台病毒(Sendai virus,SV)和MHV的标准阳性血清为一抗,经Western blot法分析重组M蛋白的抗原性.结果 经PCR法鉴定,重组杆粒Bacmid-M构建正确,可在Sf9细胞中包装出具有典型杆状形态的重组杆状病毒rBV-M.感染rBV-M的Sf9细胞于荧光显微镜下可见红色荧光,表达的重组M蛋白可与His-Tag单克隆抗体于相对分子质量26 000处发生特异性结合,且该重组蛋白仅可与抗MHV标准阳性血清发生特异性反应,与抗Reo-3、MVM及SV标准血清无交叉反应.结论 通过杆状病毒系统表达了 MHV M蛋白,该蛋白具有良好的特异性和抗原性,有望作为包被抗原用于MHV诊断试剂的研发.
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栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1004-5503.2025.11.005
发布时间
2025-12-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
辽宁省科技厅计划项目（2020JH2/10300117）
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