摘要目的 建立在Vero细胞中检测Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus-1,HSV-1)抗病毒药物敏感性的CCK-8(cell counting kit-8)法,经验证后,应用该方法进行野毒株及改造毒株的敏感性检测.方法 优化筛选CCK-8试剂培养时间(3、4、5h)、阿昔洛韦(acyclovir,ACV)稀释倍数(2、4倍)及样品培养时间(72、96、120h)后,建立检测HSV-1抗病毒药物敏感性的CCK-8法.对建立的方法进行专属性、准确度、重复性、系统适用性验证后,用其检测野生型HSV-1及其改造毒株oHSV-GFP、oHSV-GM-CSF对ACV的敏感性,并与空斑法进行比较.结果 建立的CCK-8法为:将HSV-1 与不同浓度(5、1.25、0.313、0.078 1、0.019 5、0.004 88 μg/mL)ACV混合后接种 Vero细胞,培养72 h后,加入CCK-8试剂,继续培养4 h后,采用酶标仪检测450 nm波长处的吸光度值,并计算ACV对HSV-1的半数抑制浓度(IC50).测得ACV对oHSV-1标准毒株的IC50值为0.13 μg/mL.方法专属性、系统适应性良好,准确度验证样品回收率在70％～130％范围内,重复性验证样品回收率在70％～130％范围内,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)＜20％.ACV 对野生型 HSV-1 及其改造毒株 o HSV-GFP、oHSV-GM-CSF 的 IC50值分别为 0.10、0.09、0.11 μg/mL.空斑法测得的ACV对野生型HSV-1毒株的IC50值为0.15μg/mL,与CCK-8法检测结果接近.结论 建立的检测HSV-1对抗病毒药物敏感性的CCK-8法是一种简单、实用、有效的方法,可用于各种野生型HSV-1及改造毒株对各种抗病毒药物的敏感性研究.