换一批大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)中宿主残留DNA片段大小分析方法的建立、验证及应用
Development,verification and application of an assay for the size of host cell residual DNA fragments in pandemic influenza vaccine(H5N1)
摘要目的 建立一种基于磁珠法及实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)的MDCK细胞宿主残留DNA(host cell residual DNA,HCD)片段大小的分析方法,并进行验证,以期用于评估大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)生产过程中HCD的清除效果.方法 采用磁珠法提取样品HCD,通过设计特异性引物与探针,建立可分别定量84、142、204及504 bp DNA片段的qPCR分析方法.验证方法的线性范围、定量限、精密性、准确性、耐用性及专属性.采用建立的方法分析大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)过程样品HCD片段占比,并检测HCD含量.结果 84、142、204、504 bp标准品在0.003～300 pg/μL范围内,与Ct值呈良好的线性关系,且4条标准曲线决定系数(R2)均＞0.99;84、142、204bp定量限均为3 fg/μL,504 bp的定量限为 1 fg/μL;84、142、204、504 bp对应的高、中、低浓度加标样品回收率均在50％～150％范围内;精密性、耐用性、专属性验证CV均≤40％.大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)收获液中大片段HCD占比较高(≥ 204 bp片段占比81.0％),经过酶解和纯化工序,原液中≥204 bp片段占比降至8.9％,且未检出≥ 504 bp片段,同时HCD总含量由689.9 ng/mL降至10.2 ng/mL.结论 建立了 HCD片段大小的qPCR分析方法,该方法具有良好的精密性、准确性、耐用性和专属性,可用于大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)HCD片段的分析及生产过程的质量控制.
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关键词
大流行流感全病毒灭活疫苗(H5N1)MDCK细胞宿主残留DNA片段实时荧光定量PCR磁珠法Pandemic influenza vaccine(H5N1)MDCK cellsHost cell residual DNA(HCD)fragmentQuantitative real-time PCR(qPCR)Magnetic bead method
分类号
R392-33（医学免疫学）
栏目名称
发布时间
2026-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
载体介导创新药物关键技术研发（2022023702025187）
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