换一批
换一批人源性抗血小板噬菌体抗体库的构建
Construction of human immunoglobulin combinatorial library and screening of phage antibodies to platelet
摘要目的应用噬菌体表面呈现表达系统构建一个经血小板主动免疫的人抗体组合文库,并筛选与人血小板结合的噬菌体抗体(Fab片段).方法从一反复输注血小板并出现血小板输注无效的患者的外周血分离淋巴细胞,提取mRNA, 逆转录合成cDNA,用半巢式PCR扩增重链Fd和κ轻链基因.依次将PCR产物插入载体pComb3相应的位点,构建噬菌体抗体Fab组合文库.并以人血小板膜蛋白包被96孔板,对抗体库进行3轮吸附-洗脱-扩增的亲和选择,获得与人血小板膜抗原结合的噬菌体抗体(Fab片段)库.结果半巢式PCR有效地扩增出重链Fd和κ轻链基因,以此构建了噬菌体呈现文库.通过特异性筛选,获得可与人血小板特异结合的Fab噬菌体抗体次级库.结论构建的人抗体组合文库通过筛选得到与人血小板特异结合的噬菌体抗体(Fab片段)次级库.其对抗血小板抗体药物研究、与血小板相关抗体有关的疾病研究、血小板血型抗原表位研究、进而进行血小板血型分型研究等,都有重要意义.
更多相关知识
栏目名称
论著
DOI
10.3969/j.issn.1004-549X.2002.06.001
发布时间
2004-01-08
- 浏览230
- 被引3
- 下载16
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
