摘要目的 研究不同来源的人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)对 1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phos-phate,S1P)的结合运载作用.方法 以人血浆来源HSA(plasma derived HSA,pHSA)和基因重组HSA(recombinant HSA,rHSA)样本为研究对象,首先利用LC-MS/MS技术,比较分析上述样本中S1P含量的差异;其次,在生理浓度条件下,向HSA样本中直接添加S1P进行负载处理,比较不同来源的HSA对S1P结合作用;在无血清培养条件下,将不同来源HSA样本与HUVEC细胞进行共培养,分析不同处理组的细胞培养上清中S1P含量的变化,比较不同来源的HSA对细胞中S1P的运载作用.利用表面等离子体共振SPR技术分析不同来源HSA与S1P分子的相互作用情况并计算其亲和力大小.利用AutoDock Vina软件和Molprophet平台,对HSA和S1P 进行分子对接分析,并预测HSA中S1P的关键结合口袋域.结果 S1P 含量检测结果显示,所有pHSA样本中均含有一定水平的S1P(3.31±0.03～30.35±0.07)μg/L,且不同厂家生产的pHSA样本中的S1P含量差异显著(P<0.001);然而所有rHSA样本中均未检测出S1P.负载处理结果显示,不同来源HSA对S1P的结合作用存在显著差异(P<0.001),且rHSA对S1P 平均负载量约为pHSA的 2 倍(ΔCrHSA=801.75±142.45μg/L vs ΔCpHSA=461.94±85.73μg/L;P<0.001,t=5.006).共培养处理结果显示,所有HSA样本处理组与HUVEC细胞共培养处理 6h后上清中的S1P 浓度均明显升高,而空白对照组上清中S1P浓度无变化;处理6h、12h和24h后各处理组间上清中S1P浓度均存在显著差异(P<0.001).SPR分析结果显示,与rHSA相比,pHSA与S1P之间的亲和力更高(KDpHSA-S1P:2.38E-06,KDrHSA-S1P:3.72E-06).分子对接分析和结合口袋预测发现,HSA与S1P 的关键结合口袋可能位于HSA分子的IB亚结构域.结论 不同来源的HSA对S1P均具有一定的结合运载作用,但这种作用差异具有统计学意义,与HSA分子的IB亚结构域存在关联.