换一批渗透压溶胀法在红细胞提取血红蛋白工艺中的优化
Optimization of osmotic pressure swelling method in the process of hemoglobin extraction from red blood cells
摘要目的 采用渗透压溶胀法提取红细胞中血红蛋白(hemoglobin,Hb),预期目标为血红蛋白溶出率≥80%和细胞膜完整率≥70%.方法 以人脐带血红细胞为原料,磷酸盐缓冲液为红细胞的溶胀液.选择磷酸盐缓冲液渗透压摩尔浓度、低渗磷酸盐缓冲液pH值、低渗磷酸盐缓冲液与洗涤红细胞体积比进行三因素三水平正交试验(n=3),确定较佳匹配条件.分别采用较佳匹配条件和原工艺条件制备红细胞溶胀液样品(n=6),检查血红蛋白溶出率、细胞膜完整率.扩大对比实验中,分别采用较佳匹配条件和原工艺条件制备红细胞溶胀液样品(n=6),并经超滤膜过滤,考查过滤时间、血红蛋白收率.结果 正交试验得出制备红细胞溶胀液较佳匹配条件:渗透压摩尔浓度为 30 mOsmol/Kg、pH为 7.8、磷酸盐缓冲液与红细胞体积比为 6∶1.本条件下红细胞溶胀液样品与原工艺样品比较:血红蛋白溶出率为(82.4±1.8)%vs(78.6±3.0)%(P<0.05),细胞膜完整率为(65.8±4.0)%vs(28.7±2.3)%(P<0.05).扩大对比实验中,较佳匹配条件与原工艺条件比较:过滤时间(327±9)s vs(434±13)s(P<0.05),血红蛋白收率为(72.3±1.2)%vs(66.0±1.4)%(P<0.05).结论 通过正交试验优选出的血红蛋白提取工艺与原制备工艺相比,在保证了血红蛋白溶出率略高的情况下,大大降低了细胞膜的破碎率,减少了细胞膜基质进入目标溶液中,为后续细胞膜分离及进一步纯化降低了制备难度.
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关键词
人脐带血红细胞磷酸盐缓冲液正交试验血红蛋白类氧载体human umbilical cord blood red blood cellsphosphate buffer solutionorthogonal experimenthemoglo-bin-based oxygen carrier
栏目名称
DOI
10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2025.01.015
发布时间
2025-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目（2021-I2M-1-060）
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