摘要目的 检测单采血小板在储存过程中释放的胞外囊泡—微囊泡(MVs)与外泌体(EXOs)的不同蛋白质组学特征,并探究其介导血小板储存损伤(PSL)的关键分子机制.方法 从留样袋中收集储存d3 的单采血小板标本,通过差速离心技术分离MVs及EXOs.分别提取血小板、MVs与EXOs 3 组蛋白标本,进行定量蛋白质组学技术检测差异表达蛋白.进一步采用MVs、EXOs与新鲜血小板共孵育模型评估胞外囊泡对PSL的影响:通过光学比浊法评估血小板对胶原激动剂的聚集反应和ATP 释放率的变化;流式细胞术评估血小板早期活化指标(P-selectin和PAC-1)和线粒体膜电位的变化;Western blot检测血小板活化与凋亡关键蛋白(P-selectin、Integrin β3 和Bcl-xl)表达的变化.结果 蛋白质组学分析显示血小板、MVs与EXOs 3 组标本的蛋白表达谱在潜变量空间呈现显著分离,MVs特异性富集线粒体呼吸链复合物、氧化磷酸化等能量代谢相关蛋白,EXOs则富集炎症相关蛋白.共孵育实验证实胞外囊泡能显著诱导血小板对激动剂的反应(MVs 组最大聚集率提高 187.36%,P<0.001;EXOs 组提高71.26%,P=0.002);血小板最大ATP释放率提高(MVs组 275.44%,P<0.001,EXOs组 70.18%,P=0.015).流式细胞术检测P-selectin表达增加(MVs组 119.33%,P<0.001;EXOs 组 37.95%,P=0.013).PAC-1 结合率提升(MVs组 132.18%,P<0.001;EXOs组 21.41%,P=0.043).线粒体膜电位下降(MVs组 20.49%,P<0.001;EXOs组9.73%,P=0.044).MVs组血小板P-selectin和Integrin β3 显著升高(100.83%和 395.64%,P<0.001),Bcl-xl较对照组降低(83.94%,P<0.001);EXOs组P-selectin和Integrinβ3 较对照组升高(27.89%和 181.91%,P=0.007 和P=0.002),Bcl-xl较对照组降低(36.52%,P<0.001).结论 储存血小板来源的MVs和EXOs表现出不同的蛋白质组学特征.相较于EXOs,MVs在诱导线粒体功能障碍方面作用更强,并能促进包括血小板活化和凋亡在内的PSL反应.