人源单克隆抗-P免疫球蛋白基因可变区序列分析
Sequence analysis of variable regions of human monoclonal anti-P immunoglobulin
摘要目的 阐明1株红细胞血型特异性单克隆抗体重链和轻链互补决定区的结构、基因重排方式以及体细胞高频突变特点.方法 以自行研发的分泌人源IgM κ轻链单克隆抗-P 抗体杂交瘤细胞株为研究对象,提取新鲜培养细胞总RNA,通过随机引物逆转录成cDNA第 1 链,特异性引物扩增重链和轻链基因可变区片段,并进行DNA测序获得编码抗-P抗体的免疫球蛋白重链和轻链可变区核苷酸序列,使用Ig-BLAST工具与NCBI数据库在线比对.结果 明确了 1 株人源单克隆抗-P免疫球蛋白重链和轻链可变区互补决定区(CDR)、框架区(FR)结构及V(D)J重排方式,揭示了免疫球蛋白重链基因使用的VH、VD、VJ和轻链基因使用的VL和VJ胚系等位基因片段.该株人源单克隆抗-P重链基因重排方式为:IGHV6-1?01—IGHD5-18?02—IGHJ4?02;轻链基因重排方式为:IGκV1-12?01—IGκJ3?01.重链可变区在胚系基因IGHV6-1?01 的基础上发生 9 个碱基突变,轻链可变区在胚系基因IGκV1-12?01的基础上发生 5 个碱基突变.结论 本株针对红细胞高频P抗原的单克隆抗体细胞株CDR结构的阐明,为构建重组抗体表达质粒,定向改造抗体类型奠定了基础.
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