换一批
换一批不同日龄大鼠颈上交感神经节神经元电转染方法
Optimization of electrotransfection of superior cervical ganglion neurons from rats of different ages
摘要目的 建立一种高效电转染不同日龄大鼠颈上交感神经节(superior cervical sympathetic ganglion,SCG)神经元细胞的方法.提高转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率.方法 用传统的及经改良的神经元培养液分别培养电转染后的7日龄、14日龄和40日龄SD大鼠SCG细胞,24 h后用台盼蓝染色方法观察并计算细胞成活率；通过改变质粒DNA和siRNA与转染液比例,优化转染条件,于转染24h后在共聚焦显微镜下观察并计算转染效率或干扰效率.结果 改良培养液可使14日龄以上SD大鼠SCG细胞转染后成活率达到75％以上,明显高于传统培养液转染后的成活率(P＜0.01),且结果稳定,细胞状态良好,能够满足后续实验研究的要求；优化转染条件后,DNA 的转染率及siRNA的干扰率显著提高,当DNA与转染液比例为1∶100(μg∶μL)时,细胞转染率最高；当siRNA与转染液比例为1∶50(μg∶ μL)时干扰率最高.结论 通过改良神经元培养液及优化转染条件,成功提高了电转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率,利用电转染方法可成功转染不同日龄SD大鼠SCG神经元.
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分类号
Q95-33
栏目名称
研究报告
DOI
10.3969/j.issn.1005-4847.2011.05.007
发布时间
2012-03-06
基金项目
国家自然科学基金
河北省自然科学基金
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