换一批稳定表达hSOD1G93A基因的肌萎缩侧索硬化体外细胞培养模型的建立与鉴定
Establishment and identification of a motor neuron-like cell line stably expressing hSOD1G93A
摘要目的 建立并鉴定稳定表达G93A型突变人超氧化物歧化酶(hSOD1G93A)基因的肌萎缩侧索硬化体外细胞培养模型.方法 利用活化的树突状聚合物将空质粒、hSOD1WT、hSODIG93A基因转染入VSC4.1细胞内,G418抗性筛选,从而建立稳定的肌萎缩侧索硬化体外细胞模型.用免疫荧光技术检测VSC4.1细胞系运动神经元标志物.蛋白印迹实验鉴定hSOD1WT蛋白、hSOD1G93A蛋白的表达.MTT法检测细胞模型生长曲线.结果 VSC4.1细胞分化前表达Class Ⅲ β-Tubulin、MNR2,分化后表达Class Ⅲ β-Tubulin、MNR2、NF200、MAP2等运动神经元标志物.VSC4.1-hSOD1WT、VSC4.1-hSOD1 G93A细胞均过表达人来源的SOD1,而VSC4.1-mock则不表达.与VSC4.1-mock、VSC4.1-hSOD1WT相比,VSC4.1-hSODI G93A生长缓慢,在48、72 h细胞活力均低于VSC4.1-mock(P=0.031,P=0.000)、VSC4.1-hSOD1WT(P=0.001,P=0.000),其余时间点无明显差异(P＞0.05).结论 成功建立稳定表达hSOD1WT、hSOD1G93A基因的VSC4.1细胞系,为进一步研究肌萎缩侧索硬化的发病与治疗奠定了良好的基础.
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关键词
肌萎缩侧索硬化超氧化物歧化酶基因突变VSC4.1细胞系转染Amyotrophic lateral sclerosisSuperoxide dismutaseGene mutationVSC4.1 cell lineTransfection
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-4847.2013.03.003
发布时间
2013-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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