换一批离体大鼠心肌内质网应激模型构建条件的优化
Optimization of the conditions in construction of a rat myocardial model of endoplasmic reticulum stress in vitro
摘要目的 探讨构建体外心肌内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)模型的方法及实验条件.方法 应用Langendorff灌流装置制作大鼠心脏离体缺血/再灌注模型,采用PowerLab系统持续监测血流动力学参数,Western blot检测缺血(停止灌流)不同时间/再灌注120 min后心肌ERS标志性分子糖调节蛋白(GRP) 78的表达,并检测C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测二者mRNA的表达;体外孵育心肌组织切片,分别应用不同浓度的衣霉素(tunicamycin,Tm)和二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)处理3h和6h,Westem-blot检测心肌GRP78及CHOP的表达.结果 与对照组相比,离体灌注心脏缺血40 min/再灌注120 min时,心肌GRP78表达最高(P＜0.01),CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA表达均明显升高(P ＜0.01,P＜0.05和P＜0.05),同时,各项血流动力学参数受损(均P＜0.01);Tm 10 μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌组织切片3h时,GRP78表达较对照组显著升高(均P＜0.001),CHOP表达亦均明显升高(P＜0.05和P＜0.01).结论 使用离体大鼠心脏缺血/再灌注和孵育心肌组织切片的方法,均可成功构建体外心肌ERS模型.
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关键词
心脏内质网应激缺血/再灌注损伤组织切片孵育糖调节蛋白78HeartEndoplasmic reticulum stressIschemia/reperfusion injuryTissue slice incubationGlucose-regulated protein 78
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1005-4847.2013.06.001
发布时间
2014-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（81000046）
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