肝特异性Rbp4基因敲除小鼠的建立及糖代谢特征分析

Establishment of liver-specific Rbp4 knockout mice and analysis of glucose metabolism characteristics

二维码有效期 120s

摘要目的建立肝特异性Rbp4 基因敲除小鼠模型,并初步探索肝特异性Rbp4 基因缺失对糖代谢的影响.方法利用Cre-LoxP技术,使用C57/BL6J小鼠和Alb-Cre小鼠构建肝特异性Rbp4 基因敲除小鼠模型.利用PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型.选取10 只18 周龄C57/BL6J雄性小鼠为野生对照组(WT),10 只同周龄flox纯合且Alb-Cre阴性小鼠为实验对照组(Rbp4flox/flox:Cre-),10 只同周龄flox纯合且Alb-Cre阳性小鼠为实验组(Rbp4flox/flox:Cre+).分别利用Western Blot及qRT-PCR验证小鼠肝中RBP4 蛋白及Rbp4 mRNA表达水平.利用qRT-PCR检测其他组织中Rbp4 mRNA表达水平.采用苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织形态.利用血糖仪检测小鼠尾静脉血液标本血糖值,进行葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验.利用qRT-PCR检测肝糖代谢基因磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(Pepck)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6pase)表达水平.结果成功繁育并鉴定出肝特异性Rbp4 基因敲除小鼠.Rbp4flox/flox:Cre+组小鼠肝中RBP4 蛋白表达显著减少(P＜0.05),Rbp4 mRNA表达显著减少(P＜0.05).三组小鼠脂肪、肾、胰、脾、心脏和肌肉组织中Rbp4 mRNA的相对表达量差异无显著性(P＞0.05).HE染色、葡萄糖耐量及胰岛素耐量实验结果表明肝特异性Rbp4 基因敲除对肝组织形态、葡萄糖耐量及胰岛素耐量无显著影响(P＞0.05).三组小鼠肝中Pepck mRNA表达差异具有显著性(P＜0.05),两两比较显示,Rbp4flox/flox:Cre+组小鼠肝中Pepck mRNA相对表达量较Rbp4flox/flox:Cre-组小鼠降低(P＜0.05).三组小鼠肝中G6pase mRNA表达差异无显著性(P＞0.05).结论成功构建了肝特异性Rbp4 基因敲除小鼠模型,基因缺失可抑制小鼠肝Pepck mRNA表达,为进一步探索该基因在小鼠糖代谢中的作用提供依据.

作者卢婉贤 ^[1] 马琦 ^[2] 王黎 ^[3] 刘梦迪 ^[1] 郭宝平 ^[2] 学术成果认领

作者单位新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐 830000 ^[1] 新疆医科大学第一附属医院,临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐 830000 ^[2] 新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐 830000;新疆医科大学第一附属医院,临床医学研究院省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐 830000 ^[3]

关键词 2型糖尿病视黄醇结合蛋白4 基因敲除糖代谢胰岛素抵抗 type 2 diabetes mellitus retinol-binding protein 4 gene knockout glucose metabolism insulin resistance

分类号 Q95-33

栏目名称 研究报告

DOI 10.3969/j.issn.1005-4847.2024.04.010

发布时间 2024-06-11