换一批
换一批实验动物皮肤病原真菌多重 PCR 检测方法的建立与初步应用
Development and application of a multiplex PCR assay for pathogenic dermatophytes in laboratory animals
摘要目的：建立石膏样毛癣菌（Tm）、石膏样小孢子菌（Mg）、犬小孢子菌（Mc）和猴类毛癣菌（Am）的多重PCR检测方法，用于实验动物皮肤病原真菌的快速检测。方法根据Genbank公布的四种皮肤病原真菌的18S－28S rRNA序列设计特异性引物，通过引物、dNTP、TaqDNA聚合酶浓度及退火温度和时间的优化，建立四种皮肤病原真菌的多重PCR体系。经特异性和敏感性检验后，对15份人工感染真菌大鼠毛和260份实验动物毛发样本进行检测。结果所建多重PCR方法能够有效区分四种皮肤病原真菌，产生192 bp（ Tm）、460 bp（ Mg）、290 bp（ Mc）和602 bp（ As）的目的片段，最低检测限分别为5．9 pg／μL、6．6 pg／μL、9．5 pg／μL和5．1 pg／μL。被检的15份人工感染样本扩增结果准确，260份毛发样本中未检测出四种真菌。结论所建立的多重PCR方法能够同时对实验动物中的四种皮肤病原真菌进行快速的检测，具有较高的应用价值。
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