换一批利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna 基因的初步研究
Study on the lmna gene knockdown in zebrafish embryo with morpholino oligonucleotides
摘要目的：利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼 lmna 基因的技术方法。方法在斑马鱼 lmna 基因序列中选择靶点，设计针对斑马鱼 lmna 基因的吗啉代寡核苷酸序列（lmna－MO），构建能特异指示 lmna 基因表达的 lmna－EGFP－pCS2＋重组质粒，并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中，通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应 lmna 基因表达量，并通过蛋白质印迹法检测胚胎中 lamin 蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内 lamin 蛋白的表达，分别有大小为69 KD 和62 KD 两种蛋白表达。设计并构建了 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋，单独注射 lmna－EGFP－pCS2＋质粒后观察到从6 hpf 到96 hpf 胚胎均有绿色荧光蛋白表达；二者共注射后观察到，与对照组相比，实验组从6 hpf 至30 hpf 胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失；蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内 lamin 蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎 lmna 基因表达。结论可通过 lmna－MO 和重组质粒 lmna－EGFP－pCS2＋共注射方法下调斑马鱼 lmna 基因表达，并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。
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分类号
R-33（实验医学、医学实验）
栏目名称
DOI
10.3969/j.issn.1671-7856.2016.08.014
发布时间
2016-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（NO．31260284）
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