换一批
换一批糖原贮积症0型斑马鱼疾病模型的构建及表型分析
Establishment and phenotypic analysis of a zebrafish disease model of glycogen storage disease type 0
摘要目的 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建糖原贮积症0(GSD0)型斑马鱼疾病模型,研究该病的发病进程和机制.方法 针对gys1和gys2基因各设计一个靶点,进行基因编辑和突变体筛选;利用qPCR技术检测早期发育阶段和成鱼不同组织基因表达情况,通过PAS染色技术检测糖原累积情况.结果 获得了gys1和gys2基因各两种有效突变类型的F2纯合突变体,成功构建了GSD0型斑马鱼疾病模型.gys1--纯合子F3早期胚胎发育迟缓,48 hpf内全部死亡,而gys2--纯合子发育正常.基因表达分析显示,野生型斑马鱼早期发育阶段(0～125 hpf),gys1和gys2的表达先下降后上升,受精卵时期表达最高;成鱼阶段,gys1在心脏和肌肉组织中高表达,gys2在肝中高表达.PAS糖原染色显示,与野生型相比,gys1-/-心脏和肌肉没有明显的糖原积累,gys2-/-肝没有明显的糖原积累.结论 gys1和gys2基因敲除斑马鱼模型的表型与小鼠模型相似,但也存在差异;Gys1敲除小鼠模型中F2大部分纯合子死亡,斑马鱼gys1-/-纯合子F2正常生长发育,而自交产生的F3不能存活.斑马鱼gys1和gys2敲除突变体的制备,为进一步研究人类糖原储存障碍GSD0的发病进程和机制提供了材料.
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