换一批
换一批基于CRISPR/Cas9系统构建Lep基因敲除小鼠模型
Construction of Lep gene knockout mouse model based on CRISPR/Cas9 system
摘要目的 本研究旨在利用CRISPR/Cas9 系统构建Lep基因敲除小鼠(C57BL/6N-Lepem1/Nifdc,简称ob小鼠),作为肥胖症、糖尿病等临床疾病体内药物评价的动物模型.方法 根据CRISPR/Cas9 靶点设计原则,设计能够靶向小鼠Lep基因的sgRNA,经体外转录,与Cas9 mRNA一并注射入小鼠受精卵.随后提取出生小鼠的鼠尾DNA,采用PCR检测及测序技术,得到阳性小鼠.将其与野生型小鼠进行交配传代,最终获得纯合ob小鼠,并对纯合ob小鼠进行血清生化指标检测及肝病理检测.结果 经鉴定,共得到 8 只阳性小鼠,经筛选传代,得到能够稳定遗传的阳性小鼠.纯合ob小鼠的血清生化指标甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、谷丙转氨酶(alaninne aminotransferase,ALT)含量均显著高于野生型小鼠.肝病理检测结果表明,纯合ob小鼠的肝中存在明显的炎症浸润及脂肪空泡样病变.结论 成功建立Lep基因敲除小鼠,丰富了国家啮齿类实验动物资源库,为药物临床前评价提供了动物模型支持.
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