换一批CTRP3调控SeVGMT重编程心脏纤维母细胞为心肌样细胞的机制
Effect of C1q tumor necrosis factor-related protein 3 on reprogramming of cardiac fibroblasts into induced cardiomyocyte-like cells by Sendai virus vector overexpressing Gata4,Mef2c,and Tbx5
摘要目的 探究C1q肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)调控仙台病毒(SeV)载体过表达Gata4、Mef2c和Tbx5(SeVGMT)重编程心脏纤维母细胞(CFs)为心肌样细胞(iCMs)的效率及作用机制.方法 将CFs 分为 Control 组、NC-Lv 组、CTRP3-Lv 组、NC-sh 组和 CTRP3-sh 组.使用 Lipofectamine 3000 试剂将 NC-Lv、CTRP3-Lv、NC-sh 和 CTRP3-sh 转染至 CFs,转染 48 h.然后将 Lipofectamine 3000 试剂与 SeVGMT 混合并在室温下孵育48 h,更换培养基后继续培养21 d.显微镜下观察不同培养时间点(0、3、7、14、21 d)的细胞形态.通过细胞免疫荧光、RT-qPCR和Western blot检测不同时间点的心肌特异性蛋白α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1和Myh6的表达,并计算不同时间点的跳动细胞比例.结果 随着培养时间的延长,各组CFs中α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1和Myh6的相对荧光强度、mRNA和蛋白水平均显著升高(P＜0.05),并且培养14 d时的上述心肌特异性蛋白的表达水平较培养7 d时大幅度升高(P＜0.05).培养3、7、14和21 d时,与NC-Lv 组比较,CTRP3-Lv 组 CFs 中 α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1 和 Myh6 的相对荧光强度、mRNA 和蛋白水平显著升高(P＜0.05).与 NC-sh 组比较,CTRP3-sh 组 CFs 中 α-MHC、α-actin、cTnT、Cx43、Actc1 和 Myh6 的相对荧光强度、mRNA和蛋白水平均显著降低(P＜0.05).培养7 d时,各组CFs中出现跳动细胞,随着培养时间的延长,各组CFs中的跳动细胞比例显著升高(P＜0.05),并且培养14 d时的跳动细胞比例较培养7 d时大幅度升高(P＜0.05).培养7、14和21 d时,与NC-Lv组比较,CTRP3-Lv组CFs中的跳动细胞比例显著升高(P＜0.05).与NC-sh组比较,CTRP3-sh组CFs中的跳动细胞比例显著降低(P＜0.05).结论 CTRP3可增强SeVGMT重编程CFs为iCMs.
更多相关知识
- 浏览5
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
