摘要目的 探讨限时进食(TRF)对代谢相关脂肪性肝炎(MASH)的改善作用及其分子机制.方法 (1)用高脂高胆固醇饮食诱导小鼠构建MASH模型.将 24 只C57BL/6J小鼠分为正常对照(NC)组、正常限时进食(NT)组、模型(M)组和模型限时进食(MT)组.饲养 14 周后麻醉,称重,收集小鼠血清,检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)和Fe2+的水平;收集小鼠肝脏,计算肝脏系数;油红O、苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色评估肝组织脂肪变性、炎症浸润及纤维化程度;Western blot法检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、核因子E2 相关因子2(Nrf2)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)、转铁蛋白受体 1(TfR1)、溶质载体家族 7 成员(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平.(2)用油酸-胆固醇诱导HepG2 细胞复制体外MASH模型,用血清剥夺法构建体外禁食模型.将实验细胞分为对照(Control)组、血清剥夺(FBS-)组、模型(M)组和模型血清剥夺(M+FBS-)组;用铁死亡抑制剂(Fer-1)探讨铁死亡与MASH及TRF的关系;用Sirt1抑制剂EX-527 抑制Sirt1 活性研究Sirt1 与Nrf2 介导的铁死亡的关系.油红O染色观察肝细胞脂质蓄积;试剂盒检测HepG2 细胞TC、TG、ALT、AST、MDA水平;Western blot法检测HepG2 细胞Sirt1、Nrf2、TfR1、ACSL4、SLC7A11、GPX4 和TNF-α蛋白表达水平.结果 (1)与MASH小鼠相比,TRF干预显著降低了MASH小鼠体质量及血清中TC、TG、ALT、AST、MDA和Fe2+水平(P<0.01),肝脏中Fe2+水平及TNF-α的表达也得到明显降低(P<0.01),同时改善了肝组织中的脂肪变性和纤维沉积.Western blot结果显示,TRF干预后MASH小鼠肝脏中Sirt1、Nrf2、SLC7A11、GPX4 蛋白水平显著升高(P<0.01),TfR1、ACSL4 蛋白水平显著降低(P<0.01).(2)与M组细胞相比,血清剥夺干预降低了油酸-胆固醇诱导HepG2 细胞中TC、TG、ALT、AST、MDA水平及TNF-α的表达(P<0.01),显著减少了细胞中脂滴数量.Western blot结果显示,血清剥夺干预后Sirt1、Nrf2、SLC7A11、GPX4 蛋白水平显著升高(P<0.01),TfR1、ACSL4 蛋白水平显著降低(P<0.01);Fer-1 干预后,SLC7A11、GPX4 蛋白水平显著升高(P<0.01),TfR1、ACSL4 蛋白水平显著降低(P<0.01);EX-527 干预后,Sirt1、Nrf2、SLC7A11、GPX4 蛋白水平显著降低(P<0.05 或 P<0.01),TfR1、ACSL4 蛋白水平显著升高(P<0.01),血清剥夺对M组脂肪蓄积和损伤的改善作用被显著削弱(P<0.05 或P<0.01).结论 TRF可能通过抑制铁死亡改善代谢相关脂肪性肝炎,其保护机制可能与其介导的Sirt1/Nrf2 通路有关.