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lncRNA XIST靶向miR-182-5p/HIF-2α分子轴对滋养层细胞生物学行为特性影响的机制研究

Mechanism of long-chain non-coding RNA X-inactive specific transcript on the biological behavior of trophoblast cells by targeting the miR-182-5p/HIF-2α molecular axis

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摘要目的探究长链非编码RNA(lncRNA)X染色体失活特异性转录本(XIST)调控滋养层细胞生物学活性的分子机制.方法体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,分为对照组、干扰空载组(转染si-NC)和si-XIST-1组(转染si-XIST-1)、si-XIST-1+anti-NC组(共转染si-XIST-1 和anti-NC)、si-XIST-1+anti-182-5p组(共转染si-XIST-1 和anti-182-5p).采用RT-qPCR检测细胞中 XIST、miR-182-5p 和低氧诱导因子 2α(HIF-2α)mRNA表达;CCK-8实验和EdU实验检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞中HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-182-5p与XIST、HIF-2α的靶向关系.结果与对照组、干扰空载组比较,si-XIST-1组XIST、HIF-2α mRNA水平、凋亡率及HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平降低,miR-182-5p水平、细胞活力、EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数及Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白水平升高(P＜0.05);与si-XIST-1 组和si-XIST-1+anti-NC组比较,si-XIST-1+anti-182-5p组HIF-2α mRNA水平、凋亡率及HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平升高,miR-182-5p水平、细胞活力、EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数及Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低(P＜0.05).lncRNA XIST可靶向HTR-8/Svneo细胞中的miR-182-5p,HIF-2α是miR-182-5p的靶标.结论敲低lncRNA XIST可能是通过竞争性结合miR-182-5p来抑制HIF-2α表达,进而增强HTR-8/Svneo细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞凋亡.