摘要目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其对抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)表达的影响,研究PH B蛋白在心肌细胞氧化应激中的作用.方法:实验组分为正常对照组、氧化应激组、丹参酮ⅡA高、中、低剂量组、siRNA组、siRNA +氧化应激组、siRNA阴性对照组.采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200 μmol·L(-1)过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激损伤,心肌细胞在氧化应激前给予丹参酮ⅡA(1×10-4,5×10-5,1 ×10-5mol·L(-1))预先干预24 h.采用PHB特异性的siRNA干扰心肌细胞PHB蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率、[ca2+]i及心肌细胞线粒体膜电位的变化,Western blotting检测PHB蛋白表达水平.结果:与正常对照组比较,氧化应激组心肌细胞经200 μmol· L(-1)过氧化氢作用2h后,PHB蛋白表达显著增加,细胞内游离钙浓度、凋亡率显著增高,线粒体膜电位显著降低.与氧化应激组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度及细胞凋亡率,增加线粒体膜电位,降低PHB蛋白表达水平.与siRNA阴性对照组比较,siRNA组心肌细胞内PHB蛋白表达可被显著抑制,且细胞内游离钙浓度和细胞凋亡率显著增加,线粒体膜电位显著降低.结论:PHB蛋白在心肌细胞氧化应激中可代偿性增加,对心肌细胞具有保护作用.丹参酮ⅡA可减少氧化应激损伤心肌细胞内PHB蛋白表达,其机制可能与丹参酮ⅡA减轻心肌细胞氧化应激损伤从而减少心肌细胞自身代偿性作用有关.
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