换一批青天葵ISSR-PCR体系优化及引物筛选
Optimization of ISSR-PCR Reaction System and Primers Screening in Nerviliae fordii
摘要目的:建立适合青天葵遗传差异分析的简单重复序列区间(ISSR)-聚合酶链式(PCR)反应体系.方法:采用正交试验设计对影响青天葵ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2和Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化,并结合新复极差法,对试验中各单因素进行分析.结果:确立了青天葵最佳反应体系,即在20μL的总反应体积中含有10×PCR buffer 2 μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+ 2.5 mmol·L-1,引物0.4 μmol·L-1,TaqDNA聚合酶1.0U,模板DNA 60 ng;从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.结论:建立的青天葵ISSR-PCR反应体系,经过24份青天葵样品检验,得出该体系稳定可靠,可用于青天葵遗传差异分析.
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关键词
青天葵简单重复序列区间体系优化引物筛选Nerviliae fordiiinter-simple sequence repeatoptimization of reaction systemprimers screening
分类号
R284.1（中药学）
栏目名称
DOI
10.13422/j.cnki.syfjx.2014210095
发布时间
2014-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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