换一批麻花秦艽ISSR-PCR反应体系的建立与优化
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Gentiana straminea
摘要目的:建立麻花秦艽的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系,为该药材的种质鉴定及遗传多样性等研究提供参考.方法:运用单因素试验和正交试验优选麻花秦艽的ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量,Mg2浓度,dNTPs浓度,Taq DNA聚合酶用量和引物浓度等参数,确定麻花秦艽每条引物的最佳退火温度.结果:ISSR-PCR最佳反应体系(20 μL)为模板DNA1 μL(36 mg·L-1),10×PCR缓冲液(含Mg2)1.75 μL(20 mmol·L-1),dNTPs 0.8 μL(10 mmol·L-1),Taq酶0.1μL(0.5％)及引物0.6μL(10 mmol·L-1);筛选出12条多态性高、扩增稳定的ISSR引物,UBC-809引物的最佳退火温度55.5℃.扩增出的7条带中多态性带为6条,多态性位点比率85.71％.结论:建立的麻花秦艽ISSR-PCR反应体系稳定可靠,位于500 bp处的条带为非多态性条带,可作为该种属的特征性条带.
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关键词
麻花秦艽ISSR反应体系退火温度UBC-809引物Gentiana stramineainter-simple sequence repeat reaction systemannealing temperatureUBC-809 primer
栏目名称
DOI
10.13422/j.cnki.syfjx.2015060074
发布时间
2015-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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