换一批乌头叶面细菌、真菌DGGE分析条件的建立与优化
Establishment and Optimization of DGGE Analysis Methods for Phylloplane Bacteria and Fungi of Aconitum carmichaeli
摘要目的:筛选并优化适用于分析乌头叶面细菌、真菌多样性的变性梯度凝胶电泳(DGGE)实验条件.方法:采用Touch Down-PCR技术扩增乌头叶面细菌16 S rDNA V3区域和真菌18 S rDNA～5.8 S rDNA序列,利用该扩增产物对乌头叶面细菌、真菌DGGE电泳条件进行优化.采用DGGE垂直电泳法筛选凝胶变性梯度,时间间隔法优化电泳时间.结果:乌头叶面细菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度30％ ～65％ (Gel 10％),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间7h.乌头叶面真菌DGGE最佳分析条件为变性剂梯度25％～45％ (Gel 8％),电泳温度60℃,电压120 V,电泳时间10 h.结论:利用以上优化条件能有效分离乌头叶面细菌16 S rDNA V3区及真菌18 S rDNA ～5.8 S rDNA序列,为乌头叶面细菌,真菌的群落结构PCR-DGGE分析提供可靠的技术支撑.
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关键词
乌头叶面细菌真菌变性梯度凝胶电泳Aconitum carmichaeliphylloplanebacteriafungidenaturing gradient gel electrophoresis
分类号
R282（中药学）
栏目名称
DOI
10.13422/j.cnki.syfjx.2017040058
发布时间
2017-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
基金项目
国家自然科学基金（30901962）
四川省教育厅重点项目（15ZA0098）
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