快速筛选高纯合度天麻PCR-RFLP鉴定方法

Rapid Screening of Gastrodia elata with High Purity by PCR-RFLP Identification

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摘要目的:建立一种快速筛选高纯合度天麻种质材料的方法,为其纯系育种和杂交育种奠定基础.方法:以本课题组前期天麻全基因组测序和群体重测序为基础,利用单核苷酸多态性(SNP)位点开发20个限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)标记,并采用聚合酶链式反应(PCR)-RFLP法对15份天麻种质的20个RFLP标记进行限制性内切酶实验,根据20个RFLP标记位点酶切条带数目,计算15份天麻种质的纯合度,进而对天麻种质纯合度进行评估;在此基础上,利用基因组重测序技术对评估结果进行验证.结果:利用PCR-RFLP法筛选获得10份纯合度＞95％的种质材料,其中3份种质材料的纯合度为95％,7份种质材料的纯合度为100％;利用基因组重测序法筛选获得9份纯合度＞95％的种质材料,其中8份种质材料与PCR-RFLP法检测结果一致.结论:该文所建立的用于筛选高纯合度天麻种质的PCR-RFLP法精确度为80％,准确率为89％.该方法实验操作简便、检测效率高,且成本显著低于基因组重测序技术,为天麻纯系育种提供了技术支撑,也为其他中药材品种选育研究提供了借鉴.