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基于JAK2/STAT3信号通路探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

Effect of Qiling Baitouweng Tang on Proliferation and Apoptosis in Diffuse Large B-cell Lymphoma Through JAK2/STAT3 Signaling Pathway

摘要目的:探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡、非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎症因子白细胞介素-10(IL-10)的影响.方法:以人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞增殖情况,并计算出0、4.6、9.3、18.7、37.5、75、150mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24h后的半抑制浓度(IC50)分别为9.33、16.13mg·L-1.后续相关实验根据芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24h半抑制浓度(IC50),选用芪苓白头翁汤9.5、19、38 mg·L-1开展实验.用胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9酶原活化检测试剂盒检测经0、9.5、19、38mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活化情况.酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测经0、9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24h后OCI-LY10、U2932细胞中IL-10炎症因子表达情况.流式细胞仪检测不同浓度芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24h后细胞凋亡率及细胞周期.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24h,OCI-LY10、U2932细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况及JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况,不同浓度药物作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中癌基因(c-Myc)蛋白表达情况.结果:芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h,与空白组比较,芪苓白头翁汤各组细胞增殖均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01),细胞于DNA合成前期(G1)阻滞增加(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L-1芪苓白头翁汤组 OCI-LY10、U2932 细胞中 Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3 蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变.与空白组比较,19 mg·L-11芪苓白头翁汤组、19 mg·L-1芪苓白头翁汤+10 μg·L-1IL-10组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),10 μg·L-1 IL-10组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),通路蛋白JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变.结论:芪苓白头翁汤可以抑制人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与芪苓白头翁汤调控JAK2/STAT3信号通路有关.

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