摘要目的:验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响,并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制.方法:将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg-1·d-1)、YSTLP低、中、高剂量组(1、2.5、5 g·kg-1·d-1)给予药物干预8周后取材.同窝的db/m小鼠作为正常组.体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常组、糖基化终产物(AGEs)组、AGEs+益肾通络方低、中、高质量浓度组(100、200、400 mg·L-1);原位末端标记(TUNEL)染色检测HK-2细胞的凋亡情况;细胞活力测定实验检测HK-2细胞存活率;钙离子荧光探针染色,以及荧光素酶报告基因法检测为折叠蛋白反应元件(UPRE)荧光素酶活力,检测内质网应激情况;免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏中磷酸化(p)-PERK蛋白的表达(p-PERK)、CHOP、ATF4的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠肾脏、HK-2细胞中CHOP、X盒结合蛋白1(XBP1)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肾脏、HK-2 细胞中 p-PERK、PERK、CHOP、ATF4、B 细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2 相关 X蛋白(Bax)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的蛋白表达水平.结果:细胞实验中,与正常组比较,AGEs组HK-2细胞活力显著降低,凋亡率显著升高(P＜0.01),凋亡相关因子Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Bax的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与AGEs组比较,YSTLP给药处理后,细胞活力提升,凋亡率降低(P＜0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著升高(P＜0.01),Bax的mRNA和蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著降低,cleaved Caspase-3的蛋白表达水平呈时间、剂量依赖性显著降低(P＜0.01).与正常组比较,AGEs组细胞内Ca2+失衡,UPRE荧光素酶荧光强度增加(P＜0.01),内质网应激相关因子CHOP、XBP1的mRNA水平显著升高(P＜0.01),p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平明显提高(P＜0.05);与AGEs组比较,YSTLP可有效改善HK-2细胞内Ca2+失衡,剂量依赖性降低UPRE荧光强度(P＜0.01),降低内质网应激相关因子CHOP、XBP1的mRNA水平(P＜0.01),剂量、时间依赖性降低细胞内p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平(P＜0.01).动物实验中,与正常组比较,模型组小鼠Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),cleaved Caspase-3、Bax的蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,YSTLP组Bcl-2的蛋白表达水平呈剂量依赖性提升,cleaved Caspase-3、Bax的蛋白表达水平呈剂量依赖性降低(P＜0.01).与正常组比较,模型组小鼠CHOP、XBP1 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平明显提高(P＜0.05);与模型组比较,YSTLP可显著降低CHOP、XBP1的mRNA表达水平(P＜0.01),降低p-PERK、CHOP、ATF4的蛋白表达水平(P＜0.01).结论:YSTLP可有效抑制内质网应激、改善肾小管上皮细胞凋亡情况,其作用机制可能与调节PERK/AFT4/CHOP通路有关.