基于Rho/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞迁移的影响
Effect of Mahuang Xixin Fuzitang on Migration of Dendritic Cells in Mice by Regulating Rho/ROCK Signaling Pathway
摘要目的:探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制.方法:分离并培养小鼠骨髓源性DCs,显微镜观察不同时期细胞形态变化,流式细胞术检测CD11c+比例,鉴定DCs纯度;麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50、100g·L-1)处理细胞24 h,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测麻黄细辛附子汤对细胞增殖的影响,筛选给药浓度;脂多糖(LPS)造模后,将DCs分为空白组、模型组、麻黄细辛附子汤组(2、4、8g·L-1),流式细胞术检测各组细胞表面分子CD80、CD86、主要组织相容性复合物-Ⅱ(MHC-Ⅱ)分子表达;Transwell小室观察细胞迁移情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞表面趋化因子C-C-基元受体7(CCR7)、趋化因子C-X-C-基元受体4(CXCR4)含量;免疫荧光法(IF)检测细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RhoA、ROCK1蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著升高(P<0.01),细胞迁移至下室数量显著增加(P<0.01),CCR7、CXCR4含量明显增加(P<0.05,P<0.01),F-actin表达显著升高(P<0.01),RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,麻黄细辛附子汤组(2、4、8 g·L-1)处理24 h后,CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著降低(P<0.01),细胞迁移至下室数量明显减少(P<0.05),CCR7、CXCR4含量明显减少(P<0.05,P<0.01),F-actin表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK1 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01).结论:麻黄细辛附子汤可以抑制小鼠DCs迁移,其作用机制可能与降低Rho/ROCK信号通路活性影响细胞骨架改变有关.
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