摘要目的:基于胆固醇代谢,研究雷公藤多苷片(TG)的肝损伤作用机制,及复方甘草酸苷片(CG)配伍TG减轻TG所致胆固醇代谢异常的分子机制.方法:雄性SD大鼠按体质量随机分为正常组(纯净水),TG低、高剂量(TG-L、TG-H)组(TG 189.0、472.5 mg·kg-1·d-1),TG 与复方甘草酸苷片配伍(TG-L+CG、TG-H+CG)组(给药剂量分别为 TG 189.0 mg·kg-1·d-1+CG 20.25 mg·kg-1·d-1和TG 472.5 mg·kg-1·d-1+CG 20.25 mg·kg-1·d-1),每组 6只,共5组.每日给药 1 次,连续3周.末次给药结束后,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肝组织内肝X受体-α(LXR-α)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)、胆固醇12α羟化酶(CYP8B1)、甾醇27α羟化酶(CYP27A1)在信使核糖核酸(mRNA)水平的变化;利用蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步验证关键蛋白表达水平的变化;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胆固醇合成的调控酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)的含量.以人肝癌细胞(HepG2)作为体外实验对象,观察TG对HepG2细胞的增殖抑制作用.设置TG提取物低、中、高剂量(TG-1、TG-m、TG-h)组(TG 135、45、15 mg·L-1),非诺贝特(FB)组(10 μmol·L-1)和 CG 提取物组,以及配伍组(TG-h+FB、TG-m+FB、TG-1+FB、TG-h+CG、TG-m+CG、TG-1+CG,给药浓度分别为 TG 135 mg·L-1+FB 10 μmol·L-1、TG 45 mg·L-1+FB 10 μmol·L-1、TG 15 mg·L-1+FB 10 μmol·L-1、TG 135 mg·L-1+CG 60 mg·L-1、TG 45 mg·L-1+CG 60 mg·L-1、TG 15 mg·L-1+CG 60 mg·L-1),通过 Real-time PCR、Western blot检测HepG2细胞内LXR-α、ABCG1、LDLR、CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1在mRNA水平及蛋白水平的表达变化,进一步验证CG配伍TG的减毒机制.结果:SD大鼠在体实验,与正常组比较,TG-H组大鼠肝组织CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1 mRNA水平明显下降(P＜0.05,P＜0.01);与CG联合用药后,上述3种mRNA水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01);TG-H+CG组LDLR mRNA水平显著升高(P＜0.01).与正常组比较,TG-L、TG-H组大鼠肝组织LDLR、CYP7A1、CYP8B1蛋白表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),TG-L组ABCG1的蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),TG-H组LXR-α的蛋白表达明显升高(P＜0.05).TG与CG联合用药,与同等剂量的TG单独用药组比较,配伍组ABCG1、LDLR蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01);TG-H+CG组CYP7A1、CYP8B1的蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).HepG2细胞实验,与空白组比较,TG-h组HepG2细胞内LXR-α mRNA水平显著升高(P＜0.01);TG-m、TG-h组 LDLR、CYP7A1 mRNA水平显著降低(P＜0.01),CYP27A1 mRNA水平显著升高(P＜0.01).TG与CG联合用药,对上述mRNA有显著回调作用(P＜0.01).与空白组比较,TG-m、TG-h组HepG2细胞内 LXR-α、ABCG1、LDLR、CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1 蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与 TG-h 组比较,TG-h+CG 组LDLR蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);与TG-m组比较,TG-m+CG组LDLR、ABCG1、CYP7A1、CYP27A1蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:连续3周给予大鼠189.0、472.5 mg·kg-1 TG,可调控肝细胞内胆固醇流出和胞吞及胆固醇生物转化相关信号通路,致使机体内胆固醇累积进而引发肝损伤.CG可通过上调LXR-α、LDLR、ABCG1、CYP7A1、CYP8B1及CYP27A1表达水平,促进胆固醇生物转化,缓解TG致脂质代谢紊乱诱发的肝损伤.