摘要目的:从细胞水平探讨特异性蛋白1(Sp1)-微RNA-582-3p(miR-582-3p)-细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(p27)轴过度激活对A549肺腺癌细胞周期、增殖影响,以研究黄芪-白花蛇舌草可能调控该轴抑制A549增殖的相关机制.方法:采用慢病毒质粒转染技术,获得 shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic、shRNA-Sp1+LV-mNC、shRNA-NC+LV-miR-582-3p mimic、shRNA-NC+LV-mNC的A549 4组稳转株.实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Sp1对A549肺腺癌细胞miR-582-3p表达影响;细胞增殖与活性检测法(CCK-8)、平板克隆形成实验检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞增殖影响;流式细胞术检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞周期影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞周期蛋白的影响.CCK-8检测5％、10％、20％、40％、80％黄芪-白花蛇舌草含药血清对A549细胞活力影响,并筛选出最佳浓度用于后续机制探究.上述转染技术构建oe-Sp1稳转株及对照株oe-NC,Real-time PCR检测黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞miR-582-3p表达影响;Western blot检测黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞Sp1、细胞周期依赖性激酶特异性抑制蛋白p27表达影响.结果:与shRNA-NC+LV-mNC组比较,shRNA-Sp1+LV-mNC组miR-582-3p表达显著降低(P＜0.01);与 shRNA-Sp1+LV-mNC 组比较,shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic 组显著逆转 miR-582-3p 表达(P＜0.01),提示 Sp1 对 miR-582-3p具有调控作用.与 shRNA-Sp1+LV-mNC组比较,shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组显著逆转细胞增殖(P＜0.01),提示miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549肺腺癌增殖作用;与shRNA-Sp1+LV-mNC组比较,shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组G0/G1期比例显著降低,S期、G2/M期比例显著升高(P＜0.01),提示miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549细胞周期影响;与shRNA-Sp1+LV-mNC组比较,shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组显著逆转各蛋白水平,即p27的下降与细胞周期蛋白D1(CyclinD,)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白E(CyclinE)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白(p-Rb)、E2F转录因子3(E2F3)的上调(P＜0.01),提示,miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549肺腺癌细胞周期影响.与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草含药血清明显抑制A549细胞活力,且呈浓度依赖性,故选用10％黄芪-白花蛇舌草血清干预24 h进行后续机制实验.发现,与黄芪-白花蛇舌草+oe-Vector组比较,黄芪-白花蛇舌草+oe-Sp1组显著逆转Sp1、miR-582-3p的下调与p27的上调(P＜0.01),提示Sp1可部分逆转黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌miR-582-3p、p27水平.结论:Sp1-miR-582-3p-p27轴过度激活显著促进A549肺腺癌细胞增殖,且黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用,潜在机制可能与其抑制Sp1-miR-582-3p-p27轴过度兴奋有关.