摘要目的:通过均匀设计法结合体外实验,优化菟丝子方对卵巢储备功能影响的组方配比并探讨其作用机制.方法:采用均匀设计法对菟丝子方水提物进行5因素11水平的实验设计,以细胞增殖与活性检测(CCK-8)实验测定菟丝子方水提物1～11处理的人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)活力为指标,进行多元回归分析得出最优组方配比;在中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中药百科全书数据库(ETCM)中查询活性成分潜在靶点,与疾病靶点取交集获得共同靶点,分别将共同靶点导入基因/蛋白质相互作用检索工具数据库(STRING)构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络及基因功能注释数据库(DAVID)进行基因本体(GO)分析;以CCK-8实验测定金丝桃苷对卵巢生殖干细胞活力的影响;以CCK-8、细胞增殖检测试剂盒(EdU)、细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)实验对均匀设计得出最优组方和菟丝子方水提物11(菟丝子-枸杞子-山药-茯苓-莲子4∶4∶2∶1∶1)在影响KGN细胞增殖、凋亡、雌二醇(E2)分泌方面进行对比研究,以期得出对卵巢储备功能影响的最优组方配比及初探其机制.结果:菟丝子方的278个药物靶点和1 721个疾病靶点取交集,获得共同靶点147个;GO分析显示主要涉及细胞对外源性化合物刺激的反应、凋亡过程的负调控、正向调控细胞增殖等194个生物学过程,细胞膜、线粒体、神经元细胞体等84个细胞组成,酶结合、雌激素应答元件结合、核雌激素受体结合等144个分子功能;多元回归分析得出菟丝子方各药材按照菟丝子-枸杞子-山药-茯苓-莲子27∶30∶17∶12∶14组方时增强KGN细胞活力具有最佳效果;CCK-8结果表明,与正常组比较,金丝桃苷组卵巢生殖干细胞活力显著提高(P＜0.01);CCK-8和EdU结果表明,与正常组比较,均匀设计筛选出的最优组方和菟丝子方水提物11组KGN细胞增殖能力明显提高(P＜0.05,P＜0.01);TUNEL结果表明,与正常组比较,均匀设计筛选出的最优组方和菟丝子方水提物11组明显减少KGN细胞凋亡(P＜0.05);ELISA结果表明,与正常组比较,菟丝子方水提物11组显著促进KGN细胞E2的分泌(P＜0.05),而均匀设计得出的最优组方对KGN细胞E2的分泌差异无统计学意义.结论:菟丝子方水提物11(菟丝子-枸杞子-山药-茯苓-莲子4∶4∶2∶1∶1)与均匀设计筛选出的组方(菟丝子-枸杞子-山药-茯苓-莲子27∶30∶17∶12∶14)均可能是菟丝子方改善卵巢储备功能的最佳组方配比,但尤以组方11配比效果最佳.菟丝子方可通过Hyperoside等活性成分,正向调控细胞增殖、抑制细胞凋亡等生物学过程和影响酶结合、雌激素应答元件结合等分子功能,从而促进KGN细胞增殖、E2分泌、抑制凋亡,进而发挥对卵巢储备功能的保护作用.