摘要目的:结合数据非依赖型质谱采集(DIA)蛋白质组学技术,探讨刺五加提取物(ASH)治疗帕金森(PD)小鼠的作用机制.方法:使用α-突触核蛋白(α-Syn)过表达的转基因小鼠构建PD模型,随机分为模型组、刺五加组和美多芭组,另取同月龄雄性C57BL/6小鼠作为空白组,每组各8只.刺五加组给予61.25 mg·kg-1的刺五加提取物,美多芭组给予97.5 mg·kg-1的美多芭溶液,每日1次,灌胃20 d后,采用爬杆时间和自主活动次数对各组小鼠的运动能力进行评估;苏木素-伊红(HE)染色观察PD小鼠黑质区域神经元的变化情况;免疫组化(IHC)检测黑质区域酪氨酸羟化酶(TH)活性及纹状体区域α-Syn面密度;采用DIA定量蛋白质组学技术比较各组小鼠黑质区域的蛋白表达差异;并用IHC验证关键差异蛋白乳铁蛋白(Lactotransferrin)、神经源性位点切口同源物蛋白2(Notch2)、N-Myc下游调节因子2(Ndrg2)、跨膜蛋白166(TMEM 166)表达.用细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)考察刺五加提取物对α-Syn过表达的PD细胞模型活力的影响,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测 α-Syn过表达的 PD细胞中 Lactotransferrin、Notch2、Ndrg2、TMEM 166蛋白及mRNA表达.结果:与空白组比较,模型组小鼠爬杆时间显著延长,协调能力变差,自主活动次数降低(P＜0.01),神经元肿胀数量减少;与模型组比较,刺五加和美多芭可以显著缩短小鼠的爬杆时间,显著增加自主运动次数(P＜0.01),改善神经元的损伤.与空白组比较,模型组小鼠黑质区域TH活性显著下降,纹状体区域α-Syn堆积增多(P＜0.01);与模型组比较,刺五加组TH活性明显增强,α-Syn堆积减少(P＜0.05).蛋白质组学分析结果表明,与空白组比较,模型组共筛出464个差异表达蛋白(DEPs),其中323个上调,141个下调;与模型组比较,刺五加组共筛出DEPs 262个,其中85个上调,177个下调.京都基因与基因组百科全书(KEGG)显示刺五加主要调节了 Notch信号通路,与空白组比较,模型组Notch2、Ndrg2和TMEM 166的表达上调,Lactotransferrin的表达下调(P＜0.01);与模型组比较,刺五加组Notch2、Ndrg2和TMEM 166的表达下调(P＜0.05),Lactotransferrin的表达上调(P＜0.01),IHC结果与蛋白质组学一致.体外实验结果显示,与空白组比较,模型组细胞Notch2、Ndrg2和TMEM 166 mRNA与蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),Lactotransferrin mRNA与蛋白表达水平显著降低(P＜0.01);与模型组比较,刺五加组细胞Notch2、Ndrg2、TMEM 166 mRNA与蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),Lactotransferrin mRNA与蛋白表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01).结论:ASH可能通过下调Notch2、Ndrg2的表达,从而协同阻断Notch信号通路,降低神经元损伤;并通过上调Lactotransferrin,下调TMEM 166的表达,来修复大脑铁积累,干预铁死亡,抑制线粒体自噬,阻止活性氧(ROS)损伤,保护神经细胞达到治疗帕金森的作用.