摘要目的:观察仁青芒觉对N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导的胃黏膜上皮细胞恶性转化的干预作用,并基于环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶G(PKG)/丝裂原活化蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路探讨其预防胃癌癌前病变的分子机制.方法:首先采用MNNG诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1恶性转化,建立胃癌前病变细胞模型(MC细胞);通过细胞增殖活性检测(CCK-8)试剂盒法筛选MNNG诱导GES-1细胞恶性转化的有效浓度,并摸索仁青芒觉抑制恶性转化的GES-1细胞增殖的有效浓度;将GES-1细胞分为空白组、模型组和仁青芒觉1、3、10、30mg·L-1组;其次通过Transwell迁移实验、细胞划痕实验、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)评估仁青芒觉对GES-Ⅰ细胞恶转细胞迁移能力及上皮-间充质转化(EMT)特性的影响;通过中药整合药理学计算平台(TCMIP)v2.0数据库获得仁青芒觉的化学成分候选靶点,利用美国国立生物技术信息中心基因表达(GEO)数据库胃癌癌前病变各阶段的疾病靶点,基于Metascape数据库进行通路富集分析,预测仁青芒觉的潜在作用机制;最后通过蛋白免疫印迹法(Western blot)验证仁青芒觉预防胃癌癌前病变的作用机制.结果:MNNG浓度为20 μmol·L-1时对GES-1细胞的抑制率约为50％(P＜0.01),且在此浓度下GES-1细胞体现出恶性转化的生物学特性;仁青芒觉对正常GES-1细胞增殖影响差异无统计学意义,但能显著抑制MC细胞的增殖(P＜0.01),并显著减弱MC细胞的迁移能力(P＜0.01),升高GES-1细胞的EMT进程中E钙黏蛋白的mRNA表达水平(P＜0.05),抑制N钙黏蛋白及转录因子Snail mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01);网络预测结果显示,仁青芒觉可能通过调节cGMP/PKG及MAPK/ERK相关信号通路,预防胃癌癌前病变;Western blot结果显示,仁青芒觉能显著上调cGMP/PKG信号通路中PKG、B型利钠肽受体(NPRB)蛋白表达(P＜0.01),明显下调其下游基因MEK、ERK蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:仁青芒觉能通过抑制GES-1恶性转化细胞的增殖、迁移延缓EMT进程,从而发挥预防胃癌癌前病变作用,相关机制可能与激活cGMP/PKG、抑制MEK/ERK相关信号通路有关.