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苓桂术甘汤对心肌梗死后心室重构及RhoA/ROCK信号通路的影响

Effect of Linggui Zhugantang on Ventricular Remodeling After Myocardial Infarction and RhoA/ROCK Signaling Pathway

摘要目的:探讨苓桂术甘汤对心肌梗死(MI)后心室重构(VR)小鼠及其对Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响.方法:通过手术结扎左前降支冠状动脉法建立小鼠心肌梗死模型,共60只,分为假手术组,模型组,苓桂术甘汤低、中、高剂量组(2.34、4.68、9.36 g·kg-1)及卡托普利组(3.25 mg·kg-1),每组10只.灌胃4周后使用小动物多普勒超声检测各组小鼠心功能水平;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠心肌组织形态学变化;马松(Masson)染色计算小鼠心肌组织胶原纤维沉积率;小麦胚芽凝集素(WGA)染色比较各组小鼠心肌细胞横截面积;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测纤维化相关蛋白,包括α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1);细胞凋亡相关蛋白,包括B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测通路相关基因 RhoA、ROCK1、ROCK2 mRNA表达;Western blot检测 RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组小鼠心功能水平显著下降,心肌组织形态学发生明显变化,心肌细胞横截面积显著增大(P<0.01);纤维化相关蛋白α-SMA、MMP-2、Col Ⅰ、Col Ⅲ表达显著上调(P<0.01),TIMP1蛋白表达显著下降(P<0.01);细胞凋亡相关蛋白Bax的表达显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.01);RhoA、ROCK1、ROCK2的mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01).与模型组比较,苓桂术甘汤低、中、高组及卡托普利组明显逆转了模型组的上述实验结果(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性.结论:苓桂术甘汤可显著减轻小鼠心肌梗死后心肌纤维化、心肌肥大及心肌细胞凋亡,有效逆转心室重构,其机制可能与调控RhoA/ROCK信号通路有关.

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