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基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨益经汤改善卵巢储备功能减退大鼠卵巢炎症反应的作用机制

Yijingtang Reduces Ovarian Inflammatory Responses in Rat Model of Diminished Ovarian Reserve via TLR4/MyD88/NF-κB Signaling Pathway

摘要目的:探究益经汤调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠的治疗作用及潜在机制.方法:将50只动情周期正常的雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、益经汤低剂量组、益经汤高剂量组和脱氢表雄酮组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠均以雷公藤多苷片混悬液(5mg·kg-1)灌胃14d制备DOR大鼠模型.自15d起益经汤低、高剂量组每日分别灌胃益经汤水溶液(12.579、25.158 g·kg-1),脱氢表雄酮组每日灌胃脱氢表雄酮水溶液(7.487 5 mg·kg-1),空白组和模型组大鼠每日灌胃等体积蒸馏水,连续给药30 d.阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期变化;称量双侧卵巢湿重并计算卵巢指数;苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理学改变并计算各级卵泡占比;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清性激素卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗缪勒氏管激素(AMH)及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测卵巢组织TLR4、MyD88、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB及炎症因子mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达;免疫荧光(IF)检测卵巢组织NF-κB p65入核情况.结果:与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,卵巢组织炎性浸润增多,卵巢指数显著减少、窦前卵泡比例明显下降、闭锁卵泡比例明显上升(P<0.05,P<0.01),血清中FSH、LH、TNF-α、IL-1β含量及卵巢组织中TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB、TNF-α、IL-1β mRNA 和 TLR4、MyD88、p-IκBα、p-NF-κB p65 蛋白表达水平显著升高(P<0.01),血清中 AMH、E2、IL-10含量、卵巢组织中IL-10mRNA表达显著下降(P<0.01),同时NF-κB p65蛋白大量入核.经益经汤低、高剂量和脱氢表雄酮干预后,与模型组比较,大鼠紊乱的动情周期有所改善,卵巢组织炎症浸润范围减少,卵巢指数显著上升(P<0.01),卵泡构成比发生显著变化(P<0.01),血清中 FSH、LH、TNF-α、IL-1β 含量及卵巢组织中 TLR4、MyD88、IκBα、NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA 和 TLR4、MyD88、p-IκBα、p-NF-κB p65 蛋白表达明显减少(P<0.05,P<0.01),AMH、E2、IL-10 含量、卵巢组织中 IL-10 mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01),NF-κB p65蛋白入核减少.结论:益经汤可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路炎症因子的释放和表达,减轻DOR大鼠卵巢炎症反应,进而改善卵巢功能.

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