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芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡

Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells

摘要目的:探讨不同浓度芍药汤含药血清激活肿瘤坏死因子(TNF)受体超族成员6(Fas)/Fas配体(FasL)信号通路抑制细胞凋亡对脂多糖(LPS)诱导人结直肠上皮腺癌细胞(Caco-2)炎症的影响.方法:将Caco-2细胞分为对空白组,模型组(LPS,10 mg·L-1),芍药汤含药血清5%、10%、15%、20%组,Fas抑制剂组(KR-33493,20 mmol·L-1).除空白组外,其他组用10mg·L-1 LPS刺激培养24 h制备细胞炎症模型,造模成功后,空白组、Fas抑制剂组和模型组给予空白血清,芍药汤含药血清组分别加入相应浓度含药血清处理24 h,Fas抑制剂组给予KR-33493预处理1 h.细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测各组细胞存活率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;流式细胞术检测细胞凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测组织Fas、FasL、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测组织Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、BaxmRNA表达水平.结果:实验结果中,与空白组比较,模型组细胞存活率显著下降(P<0.01);与模型组比较,5%芍药汤含药血清组差异无统计学意义,10%、15%、20%芍药汤含药血清组细胞存活率显著增高(P<0.01).由于5%芍药汤含药血清组与模型组差异无统计学意义,故后续研究选取10%、15%、20%芍药汤含药血清进行实验.与空白组比较,模型组IL-6、IL-1β、TNF-α含量均显著增高(P<0.01);细胞凋亡率显著升高(P<0.01),模型组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1β、TNF-α含量均显著降低(P<0.01),Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率显著降低(P<0.01),Fas抑制剂组及各芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),与10%芍药汤含药血清组比较,15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1β、TNF-α含量均降低(P<0.05,P<0.01),15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率明显降低(P<0.05,P<0.01),15%、20%芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01).结论:芍药汤含药血清能减少LPS干预下Caco-2细胞炎症因子的含量,下调Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白及mRNA表达水平,上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平,其作用机制可能与其调控Fas/FasL信号通路,抑制溃疡性结肠炎肠上皮细胞凋亡有关.

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