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芍药汤介导RhoA/ROCK信号通路改善Caco-2细胞炎症模型紧密连接蛋白损伤的作用机制

Shaoyaotang Alleviates Damage of Tight Junction Proteins in Caco-2 Cell Model of Inflammation by Regulating RhoA/ROCK Pathway

摘要目的:探讨芍药汤(SYT)介导Ras同源基因家族成员A/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通过改善脂多糖(LPS)诱导的人结肠癌上皮腺癌细胞(Caco-2)炎症模型紧密连接损伤的保护作用及干预机制.方法:将Caco-2细胞分为空白组,模型组(LPS,10mg·L-1),芍药汤含药血清10%、15%、20%组,抑制剂组(Fasudil,25 μmol·L-1).按分组干预24 h后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞存活率.运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞RhoA、ROCK2、闭合蛋白-5(Claudin-5)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Claudin-5、ZO-1、RhoA、ROCK2的蛋白表达量.结果:与空白组比较,模型组Caco-2细胞活力显著降低(P<0.01),Caco-2细胞ET-1、TNF-α、IL-1β、IL-6 表达显著升高(P<0.01),ZO-1、Claudin-5 mRNA 及蛋白表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK2 的mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,芍药汤含药血清10%、15%、20%组细胞活力显著增高(P<0.01),细胞ET-1、TNF-α、IL-1β、IL-6 表达显著降低(P<0.01),ZO-1、Claudin-5 mRNA 及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),RhoA、ROCK2的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01);与芍药汤含药血清10%组比较,抑制剂组及芍药汤含药血清15%、20%组ET-1、TNF-α、IL-1β、IL-6 表达明显降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1、Claudin-5 mRNA 及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),RhoA、ROCK2的mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01).结论:芍药汤含药血清可降低LPS诱导的Caco-2细胞炎症因子及内皮素水平,改善Caco-2细胞炎症模型紧密连接损伤,其机制与调节RhoA/ROCK信号通路蛋白表达相关.

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