摘要目的:采用蛋白质组学技术探讨黄芪葛根汤治疗2型糖尿病(T2DM)的作用机制.方法:采用链脲佐菌素联合高糖高脂饮食诱导T2DM大鼠模型.32只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、黄芪葛根汤(8.10 g·kg-1·d-1)组、阳性药组(盐酸二甲双胍,76.5 mg·kg-1·d-1).药物干预6周后,检测空腹血糖,并进行口服糖耐量(OGTT)实验,计算OGTT曲线下面积(AUC);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清糖化血红蛋白(GHbA1c)表达;鲎试剂检测血清中脂多糖(LPS)含量变化;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β mRNA水平.蛋白免疫印迹法(Western blot)和Real-time PCR检测各组大鼠结肠组织中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)的蛋白和mRNA水平.取正常组、模型组、黄芪葛根汤组结肠组织,采用非标记定量蛋白质组学分析各组差异蛋白,并利用Western blot和Real-time PCR对关键蛋白进行验证;最后对差异蛋白进行生物信息学分析.结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖、AUC、GHbA1c显著升高(P＜0.01);结肠黏膜上皮结构受损,并伴有炎性细胞浸润;结肠TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA水平及血清LPS含量均明显升高(P＜0.05,P＜0.01);结肠ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白和mRNA水平显著降低(P＜0.01).与模型组比较,黄芪葛根汤组大鼠空腹血糖、AUC、GHbA1c显著降低(P＜0.01);结肠黏膜上皮损伤减轻;结肠TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA水平及血清LPS含量均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);结肠ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白和mRNA水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).蛋白质组学显示,模型组与正常组比较和黄芪葛根汤组与模型组比较有70个差异蛋白呈现回调趋势;Western blot和Real-time PCR检测各组大鼠结肠组织黏蛋白2(Muc2)和转化生长因子β受体1(Tgfbr1)的蛋白和mRNA水平,与蛋白质组学结果一致.生物信息学结果显示70个回调蛋白富集到多条信号通路,其中发现TGF-β和高级糖基化终末产物/高级糖基化终末产物受体(AGE/RAGE)信号通路与肠黏膜屏障损伤密切相关,提示黄芪葛根汤可能通过调节上述通路发挥改善肠黏膜屏障损伤的作用.结论:黄芪葛根汤可能是通过调节AGE/RAGE和TGF-β等信号通路,改善肠黏膜屏障损伤,发挥抗T2DM的作用.