摘要目的:基于转录组学探讨黑逍遥散调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路改善肝郁型失眠大鼠学习记忆能力的作用机制.方法:选取雄性8周龄SD大鼠60只,随机分为空白组,模型组,黑逍遥散低、中、高剂量组(3.82、7.65、15.30 g·kg-1)和右佐匹克隆组(0.09 mg·kg-1),每组10只.除空白组外,其余各组采用慢性束缚、夹尾刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)多因素诱导肝郁型失眠大鼠模型.各给药组按相应剂量灌胃给药,1次/d,连续14d.以戊巴比妥钠协同睡眠试验、旷场实验、Morris水迷宫实验测试大鼠的睡眠质量、抑郁样行为及学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测海马组织5-羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)、一氧化氮(NO)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理改变;原位末端标记法(TUNEL)观察海马神经元凋亡情况.采用转录组学测序技术检测模型组与空白组、黑逍遥散中剂量组与模型组海马组织的差异表达基因,对交集基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并对富集到的关键基因及信号通路进行验证.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马组织磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)样蛋白11(BCL2L11)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、切割型胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达情况.结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量降低,睡眠潜伏期延长,睡眠时间缩短(P＜0.01);大鼠呈现明显抑郁样行为,学习记忆能力降低;海马组织中5-HT、GABA、NO、BDNF、GDNF含量均降低(P＜0.01);海马CA1区细胞排列紊乱,细胞形态不规则,细胞数量减少,胞核深染、固缩,空泡变性增加,细胞凋亡率升高(P＜0.01).与模型组比较,黑逍遥散高、中剂量组大鼠体质量升高,睡眠潜伏期缩短,睡眠时间延长(P＜0.05,P＜0.01);大鼠抑郁样行为,学习记忆能力明显改善;海马组织中5-HT、GABA、NO、BDNF、GDNF的含量增加(P＜0.05,P＜0.01);海马CA1区的病理损伤有所改善,海马神经元凋亡下调(P＜0.01).转录组学测序结果表明,黑逍遥散可能通过PTEN、BCL2L11、MAPK1等关键mRNA调控PI3K/Akt信号通路而发挥治疗作用.验证结果显示,与空白组比较,模型组大鼠海马组织中PTEN、BCL2L11、MAPK1 mRNA表达水平均升高(P＜0.01),p-PI3K、p-Akt、Bcl-2的蛋白表达水平均降低(P＜0.01),PTEN、Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平均升高(P＜0.01);与模型组比较,黑逍遥散高、中剂量组PTEN、BCL2L11、MAPK1 mRNA表达水平降低(P＜0.01),p-PI3K、p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.01),PTEN、Bax、cleavedCaspase-3蛋白表达水平降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:黑逍遥散可能通过下调PTEN、BCL2L11、MAPK1等关键基因的表达来调控PI3K/Akt信号通路发挥抗凋亡作用,进而改善肝郁失眠大鼠的学习记忆能力.