摘要目的:观察中药复方益糖康方(YTK)通过调控N6-甲基腺嘌呤(m6A)甲基化修饰促进细胞自噬治疗糖尿病肾脏疾病(DKD)的情况,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制.方法:选取16周龄SPF级db/db小鼠(DKD模型)45只为实验组,db/m小鼠9只为空白组,应用随机数字表法将实验组小鼠分为模型组,益糖康低、中、高剂量组(14.463、28.925、57.850 g·kg-1·d-1)、非奈利酮组2.6 mg·kg-1·d-1,给予YTK水煎液和非奈利酮灌胃8周,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清和尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL);应用全自动生化仪检测尿素(UREA)、肌酐血清(Cre-s)、尿酸(UA)及尿白蛋白与尿肌酐的比值(UACR)来评价肾脏损害;分离小鼠的肾脏组织,苏木素-伊红(HE)染色法染色观察小鼠肾脏组织形态学变化;原位末端标记法(TUNEL)观察小鼠肾脏组织细胞凋亡情况;免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏组织中甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、甲基转移酶样蛋白14(METTL14)、溶酶体相关膜蛋白2A型(LAMP2A)、微管相关蛋白轻链3 Ⅱ(LC3 Ⅱ)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)的平均光密度值;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和全自动蛋白表达分析系统(Wes)检测各组小鼠肾脏组织中METTL3、METTL14、LAMP2A、LC3 Ⅱ、螯合体1(p62)、YTHN6-甲基腺苷RNA结合蛋白3(YTHDF3)、热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白90α(HSP90AA1)的蛋白表达水平.结果:药物干预8周后,与空白组相比,模型组小鼠血清NGAL、UREA、Cre-s、UA表达水平显著升高(P＜0.01);尿液UACR、NGAL表达水平显著升高(P＜0.01);小鼠肾脏组织细胞排列无序,结构残缺,细胞边缘不清晰可见明显炎症出血点及炎性细胞浸润发生;肾脏阳性细胞凋亡个数显著上升(P＜0.01);METTL3、METTL14、NLRP3 阳性表达增多,LAMP2A、LC3 Ⅱ 阳性表达下降(P＜0.01);METTL3、METTL14、p62、HSP70 mRNA和蛋白表达显著增多,YTHDF3、LAMP2A、LC3 Ⅱ、HSP90AA1 mRNA和蛋白表达显著减少(P＜0.01);与模型组比较,各给药组小鼠血清NGAL、UREA、Cre-s、UA表达水平显著降低(P＜0.01);尿液UACR、NGAL水平显著下降(P＜0.01);小鼠肾脏组织可见细胞较规律排列,炎症出血点及炎症细胞呈不同程度减轻;肾脏阳性细胞凋亡个数显著下降(P＜0.01);METTL3、METTL14、NLRP3 阳性表达减少,LAMP2A、LC3 Ⅱ 阳性表达显著增多(P＜0.01);METTL3、METTL14、P62、HSP70 mRNA 和蛋白表达减少,YTHDF3、LAMP2A、LC3 Ⅱ、HSP90AA1 mRNA 和蛋白表达显著增多(P＜0.01).结论:中药复方益糖康通过调控m6A修饰的作用促进细胞自噬治疗糖尿病肾脏疾病,发挥中药独特的优势.