摘要目的:比较水蛭单方制剂脑血康滴丸、活血通脉胶囊和脉血康胶囊的蛋白、多肽含量及相对分子质量分布情况,评估三者的体外抗凝、抗血小板及纤溶活性,并考察温度、pH、消化酶对这3种制剂抗凝活性的影响.方法:采用二喹啉甲酸法及考马斯亮蓝法测定3种水蛭单方制剂中可溶性蛋白、多肽含量;采用凝胶电泳法结合凝胶色谱法测定3种水蛭单方制剂中相对分子质量分布情况;采用纤维蛋白原-凝血酶时间(Fibg-TT)法评价3种水蛭单方制剂的抗凝血酶活性,以活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及凝血酶时间(TT)的延长率进一步评价三者抗凝活性;采用比浊法评价3种水蛭单方制剂抗血小板聚集活性;采用纤维蛋白平板法评价3种水蛭单方制剂的纤溶活性.以相对TT为指标考察温度、pH、消化酶缓冲液对3种水蛭单方制剂抗凝活性的影响.结果:单次最低服用量下的蛋白、多肽含量排序为脉血康胶囊＞活血通脉胶囊＞脑血康滴丸.活血通脉胶囊和脉血康胶囊在4.0～90 kDa均有11个电泳条带,＞25 kDa范围内脉血康胶囊的条带更清晰,在14kDa处二者均有1条明显条带;活血通脉胶囊在9.0 kDa、脉血康胶囊在48.0 kDa处各具1条特异性条带;脑血康滴丸仅在6.5、8.5 kDa处有2条电泳条带,其主要含2 kDa以下的肽,且多数为寡肽.3种制剂的抗凝血酶活性浓度均具一定剂量依赖效应,单次最低服用量下的抗凝血酶活性浓度排序为脑血康滴丸＞活血通脉胶囊＞脉血康胶囊.3种制剂对凝血时间的延长作用均具一定剂量依赖性;在相同浓度下,脑血康滴丸和活血通脉胶囊APTT延长率＞TT延长率＞PT延长率,脉血康胶囊则为TT延长率＞APTT延长率＞PT延长率;单次最低服用量下,各制剂APTT延长率排序为脉血康胶囊＞活血通脉胶囊≈脑血康滴丸,PT延长率排序为脑血康滴丸≈脉血康胶囊＞活血通脉胶囊,TT延长率排序为脉血康胶囊＞活血通脉胶囊＞脑血康滴丸.3种制剂对二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸(AA)诱导的血小板聚集的影响均呈现出剂量依赖性,对ADP诱导下血小板聚集的影响强于AA诱导;脑血康滴丸的抗血小板聚集作用显著强于脉血康胶囊(P＜0.01),但活血通脉胶囊呈现促血小板聚集作用,3种制剂均不能溶解纤维蛋白.抗凝影响因素实验结果显示,脑血康滴丸抗凝活性受加热影响最小,活血通脉胶囊、脉血康胶囊在80℃以上5 min内活性明显降低,2 h内持续降低.与纯水比较,3种制剂的抗凝活性在较强酸性(pH 1～3)中可提高1～3倍;在胃蛋白酶缓冲液中,脑血康滴丸的抗凝活性可提高1～3倍,活血通脉胶囊、脉血康胶囊的抗凝活性则明显降低,最低分别降至约60％、20％;在胰蛋白酶缓冲液中,脑血康滴丸、活血通脉胶囊、脉血康胶囊的抗凝活性显著降低,最低可分别降至约41％、41％、35％.结论:鲜体水蛭冻干粉、水蛭粉末、水蛭回流提取所得制剂的蛋白多肽类成分含量和相对分子质量依次减小,抗凝活性逐渐降低但作用途径各有侧重,水蛭回流提取后抗血小板聚集活性显著增强;3种制剂的耐热性及胃肠稳定性依次增大,前两者适合制成肠溶制剂,后者适合常规口服.上述结果可为水蛭不同制剂方法的合理性,水蛭制剂活性物质、体内药效及机制研究提供数据参考.