摘要目的:探讨当归补血汤治疗血管性痴呆的可能作用机制.方法:60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组,当归补血汤低、中、高剂量给药组,多奈哌齐组.除假手术组外,其余各组大鼠结扎双侧颈总动脉造模.造模成功后,当归补血汤低中高浓度给药剂量分别给予9.2、18.4、36.8 g·kg-1,多奈哌齐组予3 mg·kg-1溶液灌胃,每天1次,连续灌胃4周后进行Morris水迷宫实验,新物体识别实验,尼氏染色观察海马神经元情况,免疫荧光染色观察海马神经元特异性核蛋白(NeuN)蛋白的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)、微管自噬相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,透射电镜观察海马神经元超微结构,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测海马组织还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶亚基p22phox和p47phox表达,检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平、总抗氧化能力观察氧化应激水平.结果:Morris水迷宫实验除模型组外,各组大鼠逃避潜伏期随着时间推移发生显著变化,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤给药组、多奈哌齐组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠穿越原平台次数显著减少(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤给药组和多奈哌齐组大鼠穿越原平台次数明显增多(P<0.05,P<0.01);与假手术组比较,模型组大鼠对新物体探索时间显著减少(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤中、高剂量组、多奈哌齐组大鼠对新物体的探索时间明显增多(P<0.05,P<0.01).与当归补血汤高剂量组比较,多奈哌齐组大鼠逃避潜伏期明显延长,穿越平台次数、对新物体的探索时间明显减少(P<0.05).尼氏染色示模型组大鼠海马CA1和CA3区健康神经元细胞密度减低,尼氏体丢失和细胞核萎缩或消失;当归补血汤高剂量组大鼠海马CA1和CA3区神经元密度增加,神经元排列紧密,形态正常.免疫荧光示与假手术组比较,模型组海马组织NeuN+细胞计数显著减少(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组海马NeuN+细胞计数显著增加(P<0.01).与假手术组比较,模型组大鼠PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Bax蛋白的表达显著增加(P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组大鼠PINK1、Parkin、LC3Ⅱ、Bax蛋白的表达显著降低(P<0.01),Bcl-2表达显著上调(P<0.01),中剂量组大鼠Parkin、LC3Ⅱ、Bax蛋白的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达显著上调(P<0.01).透射电镜示模型组大鼠海马神经元中线粒体出现固缩,嵴加粗,电子密度加深,可见线粒体自噬,当归补血汤高剂量组大鼠海马神经元中含有丰富的线粒体,线粒体形态结构完整,嵴清晰,基质均匀;与假手术组比较,模型组大鼠脑组织总抗氧化能力、SOD酶活性及GSH水平显著下降,MDA水平显著上升(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤中、高剂量组总抗氧化能力、抗氧化物(SOD、GSH)水平显著上升,MDA水平显著下降(P<0.01);与假手术组比较,模型组NADPH氧化酶亚基p22phox和p47phox mRNA表达显著增高(P<0.01),与模型组比较,当归补血汤给药组p22phox和p47phox mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01).结论:当归补血汤可能通过调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,发挥保护神经元的作用,从而改善学习记忆能力,治疗血管性痴呆.