摘要目的:在单细胞分辨率下系统比较中医"补肾安胎"与"健脾安胎"两大经典治法(寿胎丸、举元煎)对CBA/J×DBA/2复发性自然流产(RPL)模型小鼠母-胎界面细胞谱系及通信网络的差异化调控,并阐明其现代科学内涵.方法:将雌性未孕CBA/J鼠分别与BALB/c(空白组)及DBA/2(造模组)雄鼠合笼,造模组孕鼠随机分为补肾高/低剂量组、健脾高/低剂量组、模型组、阳性药组(地屈孕酮组),每组10只,共7组.阴栓检出次日起灌胃给药或等体积生理盐水,连续10 d.干预结束后进行检测.①药效与表型评价:小鼠一般状态、子宫湿质量、胚胎丢失率;凝血四项[凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT)]及外周血雌二醇(E2)、孕酮(Pg)水平;取连胚蜕膜进行苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜(TEM)评估病理变化;使用蛋白免疫印迹法(Western blot)定量核心蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、CXC趋化因子配体12(CXCL12)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ相关表达;②单细胞层面:取空白、模型、补肾高剂量、健脾高剂量4组连胚蜕膜(每组6只,混合3个单细胞样本/组,共使用24只),经BD Rhapsody?平台,均匀流行近似投影(UMAP)降维聚类联合小鼠细胞图谱(scMCA)数据库绘制全细胞图谱;通过基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)、CellChat解析差异表达基因(DEGs)及细胞互作网络,构建亚型细胞蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)图;基于CytoTRACE拟时序分析,追踪母/胎来源的核心免疫细胞[聚焦自然杀伤(NK)细胞]的发育轨迹.结果:①病理学及Western blot结果显示,与空白组比较,RPL组小鼠胚胎丢失率显著升高(P<0.01).连胚蜕膜Bcl-2、LIF、MMP-2、VEGF表达下降(P<0.05),CXCL12、AngⅡ、IL-6蛋白显著含量上升(P<0.05),伴血管生成受阻、凋亡-炎症失衡及凝血功能紊乱.两方均剂量依赖性地降低流产率,恢复血管生成-炎症平衡;补肾高剂量对E2水平恢复优于Pg(P<0.05).②单细胞转录组提示,与空白组比较,母胎界面蜕膜细胞、滋养层细胞、内皮细胞、成红细胞、NK细胞、巨噬细胞等多个关键细胞群存在差异,免疫和血管生成为RPL的关键环节;与RPL组比较,补肾高组(寿胎丸)可能通过逆转胚层NK细胞(上调mRNA共 17个;下调mRNA共 29个)及巨噬细胞(上调mRNA共 117个;下调mRNA共53个)等关键亚群,通过调控免疫细胞,影响未折叠蛋白、细胞黏附、程序性细胞死亡,促进蜕膜化及血管生成,调控胚-膜发育.健脾高组(举元煎)可调控胚层NK细胞(上调mRNA共9个;下调mRNA共17个)及巨噬细胞(上调mRNA共110个;下调mRNA共81个)亚群,影响蜕膜炎症及凋亡,干预糖酵解.③拟时序分析与通讯网络提示,RPL组通信频率下降,补肾高组通过NKG2D、钙黏蛋白5(CDH5)、GDF、FASLG等通路重建母胎耐受;健脾高组强化IL-6/LIFR/JAK/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)及桥粒/SEMA6/肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)信号,提高子宫内膜容受性.RPL组毒性dNK7比例升高,修复型dNK4 减少,胚胎fNK1 阻滞.补肾高组下调dNK7、提升dNK4;健脾高组抑制dNK7 终末分化并上调LILRB1,恢复细胞毒性/修复平衡.结论:补肾、健脾法均有效治疗复发性自然流产,NK及巨噬细胞是胚膜交互的关键免疫细胞,补肾法(寿胎丸)优势调控未折叠蛋白、细胞黏附、程序性细胞死亡表型,在NKG2D和CDH5信号调控中呈现更接近生理状态的表达特征,健脾法(举元煎)对上皮间质转化(EMT)、血管生成、糖酵解有优势调控作用,在IL-6、LIFR相关通路呈现较高的通讯强度.