摘要目的:从"病-证-方"关联视角,探究熟地强筋丸干预激素性股骨头坏死(SONFH)肝肾亏虚证的功效内涵,并通过体内体外实验阐释其作用机制.方法:首先,从中药整合药理学计算平台(TCMIP)、中医药百科全书数据库(ETCM)、本草组鉴(HERB)数据库收集熟地强筋丸复方所含中药的化学成分及其候选靶标信息.其次,对临床SONFH患者与健康志愿者外周血的转录组表达谱进行生物信息学数据挖掘,并整合TCMIP数据库中SONFH肝肾亏虚证相关基因,获得SONFH肝肾亏虚证的病证相关基因集.进而,构建"SONFH肝肾亏虚证相关基因-熟地强筋丸候选靶标"互作网络,通过网络拓扑特征值计算筛选核心网络靶标,并基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)与中医证候本体及多维定量关联计算平台(SoFDA)进行通路富集分析与优势症状预测.在实验验证部分,采用脂多糖联合甲基泼尼松龙注射法建立SONFH大鼠模型,分别给予熟地强筋丸2.5、5、7.5 g·kg-1(1次/d,分别相当于1、2、3倍临床等效剂量)与阿仑膦酸钠7.3×10-3 g·kg-1(1次/周,相当于1倍临床等效剂量),连续灌胃8周,通过微型计算机断层扫描、苏木素-伊红染色、免疫组织化学染色、碱性磷酸酶(ALP)染色、酶联免疫吸附测定法(ELISA)与原位末端标记法(TUNEL)染色,观察熟地强筋丸干预SONFH的疗效特点.同时,采用地塞米松刺激成骨细胞制备SONFH细胞模型,同样给予上述3个剂量的熟地强筋丸含药血清进行干预,通过细胞增殖与活力检测、ALP染色、ALP活性检测、茜素红染色、流式细胞术等观察熟地强筋丸对成骨细胞的调节作用,并通过实时荧光定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹法检测成骨相关蛋白质及目标信号轴关键因子的表达水平.结果:网络分析结果表明,熟地强筋丸候选靶标主要通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、脂质与动脉粥样硬化、催乳素、趋化因子、神经营养因子等信号通路,显著参与肌肉与骨代谢、"神经-内分泌-免疫"网络等关键环节,改善SONFH肝肾亏虚证患者的骨骼成熟延迟、复发性骨折等现代医学症状与疲乏倦怠、畏寒肢冷、肢体骨节疼痛等中医症状.其中,以PI3K/Akt信号通路的富集程度最高.体内实验结果显示,自造模第4周起,接受造模组体质量较正常组显著降低(P<0.05);经灌胃6周后,与模型组比较,各剂量熟地强筋丸组体质量显著升高(P<0.01).与正常组比较,股骨头组织骨密度(BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨钙素(OCN)、ALP与血液中骨特异性碱性磷酸酶(BALP)含量显著降低(P<0.01),骨小梁分离度(Tb.Sp)、组织空骨陷窝率与细胞凋亡率显著升高(P<0.01).与模型组比较,熟地强筋丸干预组BMD、BV/TV、Tb.N显著升高(P<0.01),Tb.Sp、空骨陷窝率、细胞凋亡率显著降低(P<0.05),OCN、ALP的蛋白质含量及BALP水平显著升高(P<0.05).体外实验结果显示,各梯度熟地强筋丸含药血清对成骨细胞均无损伤作用;与正常组比较,模型组成骨细胞的增殖活性、ALP活性与钙化结节形成率显著降低(P<0.01),OCN、Runt相关转录因子2(RUNX2)的转录水平显著降低(P<0.01),骨桥素(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白A1(ColⅠA1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、PI3K与磷酸化(p)-Akt的蛋白质含量显著减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01).与模型组比较,熟地强筋丸含药血清组的增殖活性、ALP活性、钙化结节形成率、OCN与RUNX2的转录水平、OPN、ColⅠA1、Bcl-2、PI3K与p-Akt的蛋白质含量均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.01).结论:熟地强筋丸可有效减轻SONFH肝肾亏虚证的疾病严重程度、改善骨微结构,且疗效具有剂量依赖性.该方改善SONFH肝肾亏虚证的作用机制可能与其通过调节肌肉与骨代谢、矫正"神经-内分泌-免疫"网络失衡等关键环节,促进成骨细胞分化和抑制成骨细胞凋亡有关,其中PI3K/Akt信号轴可能是该方关键作用通路之一.