摘要目的:探究仲景法炮附子与药典方法生附片、黑顺片及水煎液的温阳散寒药效及机制.方法:将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、生附片组、炮附子组、黑顺片组及炮附片组,每组6只.除空白组外,其余各组大鼠均肌肉注射氢化可的松琥珀酸钠诱导虚寒证模型,连续14 d后,各附子饮片以12 g·kg-1·d-1剂量持续灌胃7 d,空白组和模型组给予等量的生理盐水.给药结束后,测体质量、脾脏及胸腺质量,计算脾脏指数和胸腺指数;采用苏木素-伊红(HE)染色观察肾上腺组织病理形态;采用全自动生化仪检测血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、乳酸脱氢酶(LDH)及乳酸(LAC)的水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测17-羟皮质类固醇(17-OHCS)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、免疫球蛋白(Ig)M、IgG、环磷酸腺苷(cAMP)及环磷酸鸟苷(cGMP)水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中蛋白激酶A(PKA),cAMP反应元件结合蛋白(CREB),沉默信息调节因子1(Sirt1)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的表达水平;采用高效液相色谱法(HPLC)检测主要的生物碱成分含量,并和药效指标进行Pearson相关性分析.结果:造模14 d后,与空白组比较,模型大鼠出现精神萎靡、大便糖稀等症状,肾上腺组织结构轻度异常,脾脏和胸腺指数均显著降低(P<0.01),甲状腺、肾上腺及免疫系统功能受到抑制,且血清中cAMP水平降低,cGMP的水平显著升高(P<0.01).与模型组比较,4种附子饮片均可改善氢化可的松造成的肾上腺损伤,并明显升高脾脏指数(P<0.05,P<0.01),生附片和炮附子可明显提高胸腺指数(P<0.05);生附片和炮附子可明显升高T3、TSH、17-OHCS及CORT的水平(P<0.05).此外,生附片、炮附子及炮附片可显著升高IgG的水平(P<0.01),炮附子和黑顺片可明显升高IgM的水平(P<0.05);对于环核苷酸系统,炮附子可明显升高cAMP,同时降低cGMP的水平(P<0.05),在4种饮片中作用最明显;对于能量代谢指标,炮附子可明显改善TC、TG、LDH及LAC等异常指标(P<0.05);黑顺片对于TG、LDH及LAC具有明显的改善作用(P<0.05);炮附子和生附片均可显著升高PKA、CREB、Sirt1和PGC-1α蛋白的表达水平(P<0.01).此外,附子中的双酯型生物碱与TG、IgG、CORT呈强正相关,与LAC呈强负相关,与T4呈中等正相关,与cAMP和脾脏指数呈中等负相关;单酯型生物碱与TG和IgG呈强正相关,与LAC呈强负相关,与CORT和T4呈中等正相关,与cAMP和脾脏指数呈中等负相关;而水溶性生物碱的含量与TC、LDH、17-OHCS、T3、TSH及胸腺指数呈强正相关,与cAMP、CORT、T4及脾脏指数呈中等正相关,与cGMP呈中等负相关.结论:在不同制附子饮片中以仲景法炮附子温阳散寒的效果最好,其可通过调节甲状腺、肾上腺、免疫、环核苷酸系统及物质能量代谢等途径发挥药效.其中,水溶性生物碱与更多的虚寒证指标呈现强或中等的相关性,且在炮附子中的含量最高,因此仲景法炮附子可能通过水溶性生物碱发挥温阳散寒药效.