摘要目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨助卵汤抑制人卵巢颗粒细胞(KGN)过度自噬改善早发性卵巢功能不全(POI)的作用机制.方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法确定环磷酰胺作用于KGN建立POI细胞模型最优浓度,并基于此检测不同含量助卵汤含药血清对KGN细胞模型活力的影响.确定最佳给药浓度后,将KGN分为空白组(20％空白血清)、模型组(20％空白血清+5 μmol·L-1环磷酰胺)、助卵汤含药血清组(20％助卵汤含药血清+5 μmol·L-1环磷酰胺)、自噬抑制剂组(20％空白血清+5 μmol·L-1环磷酰胺+20 μmol·L-1磷酸氯喹)、自噬抑制剂+助卵汤含药血清组(20％助卵汤含药血清+5 μmol·L-1环磷酰胺+20 μmol·L-1磷酸氯喹)、补佳乐组(20％补佳乐含药血清+5 imol·L-1环磷酰胺),培养48 h后,通过流式细胞术检测各组KGN的凋亡率,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组KGN中PI3K、p-Akt和Akt、磷酸化(p)-mTOR和mTOR信号通路蛋白表达情况,以及Beclin1、ATG5和微管相关蛋白1轻链3(LC3)等自噬相关蛋白的表达情况,采用单丹磺酰尸胺(MDC)染色检测各组自噬的程度.结果:5 μmol·L-1环磷酰胺处理KGN细胞48 h可以构建KGN的POI细胞模型,明显抑制KGN细胞增殖,且环磷酰胺对KGN细胞增殖的抑制能力与环磷酰胺的浓度呈正相关;20％及30％含量的助卵汤含药血清能促进细胞增殖,缓解环磷酰胺对KGN细胞增殖的抑制作用,且2个浓度疗效相当;与空白组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P＜0.01),PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),自噬相关蛋白Beclin1、LC3及ATG5蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),而Akt与mTOR蛋白表达水平未见显著变化,MDC自噬荧光强度显著升高(P＜0.01);与模型组比较,空白组、模型组、卵汤含药血清组、自噬抑制剂组、自噬抑制剂+助卵汤含药血清和补佳乐组细胞凋亡率均明显降低(P＜0.05,P＜0.01),自噬抑制剂+助卵汤含药血清组疗效最佳;PI3K、p-Akt及p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01),自噬抑制剂+助卵汤含药血清组升高最显著(P＜0.01),自噬相关蛋白Beclin1和ATG5表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01);助卵汤含药血清组和补佳乐组LC3蛋白表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01),自噬抑制剂组和自噬抑制剂+助卵汤含药血清LC3蛋白表达下降,但差异无统计学意义.结论:助卵汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞过度自噬,逆转环磷酰胺对KGN细胞模型的损害作用,达到改善POI的目的.