摘要目的:利用网络药理学、分子对接和分子动力学模拟来探究小青龙汤(XQL)防治高原肺水肿(HAPE)的潜在作用机制,并通过体内动物模型进行实验验证.方法:该研究首先从B ATM AN-TCM、GeneCards和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)收集XQL的活性成分、药物靶点及HAPE相关靶点.利用交集靶点构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并借助Cytoscape软件对核心靶点进行筛选和可视化展示.通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)功能富集对交集靶点进行功能注释和通路分析.采用AutoDock和GROMACS软件评估活性成分与关键靶点的结合能力.在实验验证部分,建立低压低氧(模拟6 000 m海拔,持续48 h)诱导小鼠HAPE模型.通过以下方法评估防治效果:苏木素-伊红(HE)染色、肺组织含水量、肺组织湿/干质量比、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基因表达水平,以及免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键蛋白表达情况.结果:网络药理学分析共获得XQL活性成分355个,作用靶点2 142个,HAPE相关靶点716个,二者交集靶点236个,筛选出白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)、蛋白激酶B1(Akt1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)等关键核心靶点.共同靶点的GO分析结果共涉及生物过程(BP)738种,细胞组成(CC)72种,分子功能(MF)135种,KEGG分析有效地富集到磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt和HIF-1α2条重要信号通路.分子对接和分子动力学模拟结果表明,筛选的活性成分与关键靶点结合力较好.在低压低氧(6 000 m,48 h)诱导的HAPE模型中,模型组小鼠肺含水量、肺组织湿/干质量比及病理损伤评分显著升高(P＜0.01),肺泡内和肺泡间质可见大量红细胞渗出,炎性细胞显著增加,肺泡间隔明显增宽,肺泡之间相互融合.XQL给药组显著改善上述病理变化(P＜0.01).炎症因子表达结果表明,相比正常组,模型组小鼠肺部组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达均显著上调(P＜0.01);而与模型组比较,XQL给药组中的炎症因子的表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).关键通路的相关基因PI3K、Akt1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α的mRNA表达在模型组显著增加(P＜0.01),XQL给药后呈浓度依赖性降低(P＜0.05,P＜0.01).免疫组化和Western blot分析肺部组织中关键蛋白PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt1、p-Akt1、mTOR、p-mTOR、HIF-1α的表达水平,与正常组比较,模型组中关键蛋白表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,XQL给药组中关键蛋白的表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:小青龙汤能够减轻肺部炎症并改善高原肺水肿,其机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR和HIF-1α通路的表达有关,该研究为中医药XQL治疗HAPE提供了新的思路和理论依据.