禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化
EXPRESSION AND PURIFICATION OF RECOMBINANT PROTEIN R22-AG85B OF MYCOBACTERIUM AVIUM SUBSP. PARATUBERCULOSIS
摘要为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因.采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-ag85B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B.将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测.检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65 ku.Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性.禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础.
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