换一批猪TREX1基因的真核表达及其在JEV感染中的作用研究
Eukaryotic Expression of Porcine TREXI Gene and Its Effect on Japanese Encephalitis Virus Infection
摘要为了明确猪TREX1在JEV感染中的作用,本研究利用PCR扩增获得猪TREX1基因的ORF,并将该基因克隆至真核表达载体p3xFlag-CMV-14中,将构建的重组真核表达质粒命名为pFlag-pTREX1,利用lipofectamine 2000将构建成功的pFlag-pTREX1重组质粒瞬时转染至293T细胞中,通过Western blot检测其表达情况,最后在PIEC细胞上,通过猪TREX1基因过表达或沉默TREX1基因的表达,分析其在JEV感染中的作用.结果显示:本研究成功构建了Flag-pTREX1真核表达载体;利用抗Flag抗体可以识别真核表达的Flag-pTREX1融合蛋白,约35 kDa;与转染Flag-vector的样品相比,过表达猪TREX1促进JEV在PIEC上的感染;与NC对照组相比,沉默猪TREX1基因的表达抑制JEV在PIEC上的表达.结果表明,本研究成功构建了猪TREX1基因真核表达载体并初步探索了猪TREX1在JEV感染中的作用,这为进一步研究猪TREX1在猪源病毒中的作用奠定了基础.
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